人破骨细胞分化细胞因子套装 Human Osteoclast Induction Cytokine Set（92672ES）

本试剂盒包含重组人M-CSF和人RANKL，用于诱导人种属来源的前体细胞（如THP-1或PBMC）分化为具有成熟骨吸收功能的破骨细胞。

M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)支持前体细胞的存活、增殖，并使其具备向破骨细胞分化的潜能，是分化的“许可”信号。RANKL（核因子κB受体活化因子配体）是驱动破骨细胞终末分化与融合的决定性信号，激活下游NFATc1等关键转录程序。

本试剂盒中的M-CSF和RANKL，具有高活性、高纯度、低内毒素的特点。本试剂盒能高效驱动前体细胞分化为破骨细胞，可获得大量多核、TRAP强阳性的成熟破骨细胞。

产品组分

产品包含

人单核细胞来源破骨细胞培养方案

1. 人单核细胞获取

1.1  PBMC分离

采集外周血于EDTA抗凝采血管中，将血液混匀于无菌50ml管中，PBS 1:1稀释血液标本；取干净的50ml管，淋巴细胞分离液、血液、PBS以1:1:1加入，每管15ml分离液，用10ml移液管，沿管壁缓缓加入上述血液稀释液至45ml刻度处，切忌分离液液面波动；室温500g离心30min，升降速度分别调至2和0。根据血液中各组成成分密度的不同，离心后，50ml管内由上而下依次为淡黄色血浆层，单个核细胞白膜层，透明分离液层，及最下方的红细胞层；用移液管轻轻吸去上层血浆层，并将白膜层转移至新的50ml管中，同时加入PBS至50ml，300g离心10min；离心结束后弃上清，弹散管底沉淀，再加入PBS至50ml，300g离心10min；离心结束后弃上清，将细胞沉淀弹散。

1.2  单核细胞纯化

单核细胞纯化采用商业化的单核细胞阳选试剂盒，具体分离方案参考相应厂家的说明书。

2. 破骨细胞诱导分化

2.1 用α-MEM完全培养基(α-MEM培养基+10%FBS+双抗)重悬细胞至5×10^5/ml，加入终浓度为40ng/ml的Human M-CSF和100ng/ml的Human RANKL；

2.2 按96孔板每孔加入200 μl细胞悬液，加入完成后，左右上下摇晃96孔板几下，在超净台中静止10 min，待细胞沉降后于倒置显微镜下观察是否铺板均匀，铺板均匀后放入37℃培养箱中培养分化；(若是24孔板，可加入1.5~2ml诱导分化)

2.3 每3天更换培养基一次，同时补充新鲜的培养液(含40ng/ml的Human M-CSF和100ng/ml的Human RANKL)，诱导分化10天后即可见开始融合的细胞。

注：细胞因子购买后请按照说明书指示溶解并稀释保存，不可反复冻融，诱导分化培养基请根据每次的用量配置，用多少，配置多少。

高活性、高纯度、高稳定性、低内毒素

                          图1.trap染色后的破骨细胞

数据来源于温州医科大学附属第二医院（RANKL 使用浓度100ng/mL， M-CSF使用40ng/mL）

-85 ~ -65℃保存，收到货之后有效期1年。复溶后， 无菌条件下，-85 ~ -65℃保存，3个月有效期。