本试剂盒包含重组小鼠M-CSF和小鼠RANKL，用于诱导小鼠来源的前体细胞（如RAW264.7细胞系或原代骨髓单核细胞）分化为具有成熟骨吸收功能的破骨细胞。
M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)支持前体细胞的存活、增殖，并使其具备向破骨细胞分化的潜能，是分化的“许可”信号。RANKL（核因子κB受体活化因子配体）是驱动破骨细胞终末分化与融合的决定性信号，激活下游NFATc1等关键转录程序。
本试剂盒中的M-CSF和RANKL，具有高活性、高纯度、低内毒素的特点。本试剂盒能高效驱动前体细胞分化为破骨细胞，可获得大量多核、TRAP强阳性的成熟破骨细胞。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 92649ES10 | 92649ES50 |
| 92649ES-A | Mouse M-CSF Protein | 10 μg | 50 μg |
| 92649ES-B | Mouse RANKL Protein | 25 μg | 100 μg |
产品包含
| 组分原货号 | 产品名称 | 参考使用浓度 | 来源 | 外观 | 数量 |
| 91114ES | Mouse M-CSF Protein | 50 ng/mL | E.coli | 冻干粉 | 1 |
| 95625ES | Mouse RANKL Protein | 100 ng/mL | HEK293 | 冻干粉 | 1 |
复溶方法
| 组分名称 | 复溶方法 |
| Mouse M-CSF Protein | 开盖之前，先离心，以将内容物带到底部。使用无菌蒸馏水或PBS复溶，重新配制至0.1-1.0 mg/mL的浓度，可根据后续实验更进一步稀释；长期储存，建议稀释缓冲液中加入载体蛋白(0.1% BSA)；分装为一次实验用量，-80℃冻存，避免反复冻融。 |
| Mouse RANKL Protein | 开盖之前，先离心。使用蒸馏水复溶冻干的蛋白质，复溶浓度超过100 μg/mL。建议首次使用时将蛋白分装为每次实验用量，避免反复冻融。 |
Raw264.7诱导破骨细胞实验方案
1.破骨细胞前体细胞接种
1.1 将生长状态良好的Raw 264.7细胞用含10%胎牛血清（FBS）的α-MEM完全培养基重悬，并进行细胞计数。
1.2 将细胞以2.5 × 10³ cells/mL的密度，接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中，每孔加入1mL细胞悬液。
1.3 将培养板置于37°C、5% CO₂的细胞培养箱中静置培养18小时，使细胞充分贴壁。
2.破骨细胞诱导分化
2.1 细胞贴壁后（接种后约18小时），吸弃孔内旧培养基。
2.2更换为新鲜的破骨细胞诱导完全培养基。诱导培养基为含10% FBS的α-MEM培养基，并补充50 ng/mL重组小鼠M-CSF 蛋白及 100 ng/mL重组小鼠RANK L蛋白。
2.3此后，每3天更换一次诱导培养基。更换时，轻柔吸弃旧液，并加入等体积的、含有相同浓度M-CSF蛋白与RANK L蛋白的新鲜诱导培养基。
3. 细胞形态学观察与鉴定
3.1形态观察：自诱导开始，定期在倒置显微镜下观察细胞形态变化。通常，在RANK L诱导 4天 后，可观察到典型的多核破骨细胞样结构。
3.2 TRAP染色验证：RANK L诱导 5天 后，进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色以特异性鉴定破骨细胞。严格按照TRAP染色试剂盒的说明书步骤进行染色操作。
染色完成后，在光学显微镜下观察。成熟的破骨细胞胞浆呈红色或红紫色。
高活性、高纯度、高稳定性、低内毒素
-25 ~ -15℃保存，收到货之后有效期1年。
复溶后，无菌条件下，2~8℃保存，7天有效期。复溶后， 无菌条件下，-85 ~ -65℃保存，3个月有效期。
