弹性蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,同时也能水解酰胺和酯类。由于弹性蛋白在结缔组织的弹性纤维中浓度最高,弹性蛋白酶常用于解离含有大量细胞间纤维网络的组织。结缔组织细胞和纤维所嵌入的黏稠细胞外基质是一种由多种糖蛋白组成的复杂混合物。鉴于该基质的复杂性,当弹性蛋白酶与其他酶(如胶原酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶)联合使用时,蛋白水解消化效果最佳。
本产品来源于猪胰腺,猪胰腺弹性蛋白酶由一条包含240个残基的单肽链组成,含有四个二硫键,分子量约25.9 KDa,pH最佳值约为8.5。它与其他物种的胰腺弹性蛋白酶具有高度的序列同源性,比如与大鼠有86%的同源性。弹性酶I和弹性酶II基因在序列上具有相似性,尤其是在5'近端侧翼区域,包括TATA盒和一个假定的组织特异性增强子序列。猪弹性蛋白酶I特异于Ala-Ala和Ala-Gly键,而弹性蛋白酶II则对P1位中至大疏水氨基酸的底物具有广泛特异性。猪弹性蛋白酶是最强效的弹性蛋白酶,其速率比人类白细胞弹性蛋白酶高出20倍。
猪胰腺弹性蛋白酶在蛋白酶中具有独特性——能够水解天然弹性蛋白,而这种底物不会被胰蛋白酶、糜蛋白酶或胃蛋白酶攻击。大豆胰蛋白酶抑制剂和激肽释放酶抑制剂能够抑制蛋白水解活性,但不抑制弹性蛋白酶水解活性。
本产品以冻干粉形式提供,广泛应用于组织和细胞解离操作,在II型肺细胞分离中效果尤其显著。
产品信息
| 货号 | 40516ES08 / 40516ES10 / 40516ES60 / 40516ES80 |
| 规格 | 5 mg / 10 mg / 100 mg / 1 g |
| 分子量 | ≈25.9 KDa |
| 外观 | 冻干粉末 |
| 酶活力 | ≥3 U/mg protein |
| 酶活力单位定义 | 在25°C、pH 8.0条件下,每分钟水解1 μmol N-琥珀酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酸-对硝基苯胺的酶量为一个单位 |
| 最适pH | 8.0~8.5 |
| 等电点 | 9.5 |
| 抑制剂 | DFP,烷基异氰酸酯,PMSF,α1-抗胰蛋白酶,α2-巨球蛋白,丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的二肽衍生物,硫酸盐修饰脂质等 |
| 来源 | 猪胰腺 |
产品应用
1. 组织解离:由于弹性蛋白在结缔组织的弹性纤维中浓度最高,弹性蛋白常用于解离含有广泛细胞间纤维网络的组织。为此,它通常与其他酶如胶原酶、胰蛋白酶和乳糜蛋白酶一起使用。尤其适用于II型肺细胞分离。
2. 膜蛋白溶解
3. 蛋白质序列研究
使用方法(仅供参考,具体请结合相关文献和实际实验条件进行调整)
1. 弹性蛋白酶储存液的配置
1.1 弹性蛋白酶Elastase可以用常见的平衡液溶液溶解,如0.05 M Tris-HCl缓冲液(pH 8.0~8.5),该pH范围是酶的最适环境,能够保持酶活性并避免在pH≤3.5时失活。具体配置的浓度根据具体应用调整。
【注】产品在浓度高于0.25%且中性pH环境中时,溶解度较差,易产生不溶物。如需配置高浓度缓冲体系,建议可以先用碱性缓冲液配置,再稀释至中性pH缓冲体系中(具体见注意事项1)。
1.2 配置好后用0.22 µm滤膜过滤除菌,可按需分装成小量,避免反复冻融。过滤后的储存液2~8℃保存约1-2周,如需长期保存,建议分装后,-25~-15℃或-85~-65℃保存,冻存前将缓冲液pH调至8.5左右稳定酶活性。
2. 动物模型(如COPD小鼠模型):
工作剂量:在COPD小鼠模型中,弹性蛋白酶Elastase的使用剂量可考虑为6 Units/只小鼠,每次雾化15~20 min,每周1次,持续4个月,再用0.3%戊巴比妥钠(50 mg/kg,腹腔注射)麻醉,通过气管插管连接肺功能测试仪器进行肺功能检测。
注意事项
1. 弹性蛋白酶在pH值低于3~4时不稳定。弹性蛋白酶冻干粉在中性pH(如pH 7~8)且浓度高于0.25% (w/v)时溶解度较低,易形成絮状物或不溶物。若发现溶液混浊,可能是溶解度不足导致的,需要重新配制或使用更高pH的缓冲液溶解。
2. 如果需要配置到高浓度的缓冲液,建议最好先用KCl或碱性缓冲液(如pH 9~10)配置原液,充分溶解后,再用中性缓冲液稀释到工作浓度,或者加到反应混合物或培养基中,以补偿离子强度或pH值的变化。pH值在4.0~10.4之间会较为稳定。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅用于科研用途。
粉末2~8℃避光保存,有效期1年。储存液-25~-15℃避光冻存。





