木瓜蛋白酶(Papain),一种半胱氨酸蛋白酶,具有广泛且特异的切割活性。包含肽链内切酶活性,可裂解碱性氨基酸、亮氨酸或甘氨酸肽键;还具有酰胺酶以及酯酶活性。该酶由单一肽链组成,包含3个二硫键和1个维持酶活性的巯基基团,其活性位点包含7个亚单位(S1-S4和S1’-S3’),其中每个亚单位可容纳底物1个氨基酸残基。其活性主要由S2亚单位控制,该单位为可容纳底物分子P2侧链的疏水区,Papain特异性主要决定于位于该疏水区的疏水氨基酸或芳香族氨基酸残基。
木瓜乳液至少富含4种半胱氨酸内肽酶,包括木瓜酶、木瓜凝乳蛋白酶、氨基乙酰基肽链内切酶和木瓜蛋白酶Ω等。存在于乳汁细胞中的内肽酶处于非活化状态,但是一旦从乳汁细胞中分泌出来则迅速转化为活性状态。木瓜蛋白酶在上述内肽酶中含量很少,但是该酶易于分离纯化,研究的也最多。
本产品易溶于水和缓冲溶液。在常温下稳定,但需避光保存,避免高温和极端pH值。
产品优势:
- 高效活性:具有高比活性(≥15 units/mg protein),能够快速分解蛋白质。
- 特异性:对肽键具有特异性,能够水解多种蛋白质和肽类。
- 温和反应条件:在较温和的条件下(如中性或弱酸性环境)即可发挥作用。
- 广泛应用:可用于食品、医药、化妆品等多个领域
在生化研究中具有多种应用:
1)在某些组织的水解过程中,木瓜蛋白酶比其他蛋白酶作用效果更好,但破坏性更低,常用于原代或神经元细胞解离,例如,木瓜蛋白酶可从产后小鼠中分离具有活力和完整细胞形态的皮质神经元、平滑肌细胞等。其研究表明,该酶分离得到的平滑肌细胞对兴奋刺激的敏感性不受影响;
2)用于某些蛋白质或酶的结构研究;
3)用于红细胞血清学修饰红细胞表面以增强或破坏一些红细胞表面抗原的反应性;
4)用于血小板血清学;
5)用于氨基酸、多肽、其他分子的酶促合成;
6)从IgG和IgM中制备抗体Fab片段;
7)完整膜蛋白酶的溶解;
8)用于从纯化的蛋白多糖内生产糖蛋白。
本品为经两次结晶悬液制备得到的冻干粉末,来源于番木瓜乳液(Caricapapayalatex),比活力≥15units/mgprotein。
冰袋运输。4℃保存。有效期6个月。
注意事项
1)为保证得到完全活性的木瓜蛋白酶,该酶需在酶活化缓冲液(含1.1 mM EDTA,0.067 mM mercaptoethanol和5.5 mM cysteine-HCl)中孵育30 min。建议使用前用0.22 μm滤膜过滤。
2)制备好的木瓜蛋白酶悬液放到4℃保存,不可冻存。
3)含有NaCl的木瓜蛋白酶悬液4℃保存约可稳定保存几个月,没有明显的酶活力丧失。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途!
Q: 木瓜蛋白酶说明书所列的缓冲液可以使用其他缓冲液替代吗?
A: 没有其他缓冲液可以替代。
溶解方法:粉末状木瓜蛋白酶溶于水(10 mg/mL)形成储存液。在使用之前,通常在含有~5 mM L-半胱氨酸的缓冲液中进行稀释。
活化:木瓜蛋白酶最适pH范围为6.0-7.0,使用前应在活化液中孵育,以确保充分活化。
活化方法:将酶在含有1.1 mM EDTA,0.067 mM巯基乙醇和5.5 mM半胱氨酸-HCl的溶液中孵育30分钟。 建议在溶解后和使用前将酶通过0.22微米滤膜过滤。
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