丙酮酸激酶(PK)比色法测定试剂盒 Pyruvate Kinase Assay Kit(Colorimetric Method)（60430ES）

本试剂盒采用比色法测定丙酮酸激酶（PK）的活性，测定原理如下：丙酮酸激酶（PK）在ADP存在下可催化PEP产生丙酮酸，丙酮酸再由LDH将其转变为乳酸，同时将NADH变为NAD。

该方法的优点包括快速简便，适用于检测各种动物血清（浆）、组织等样本中的丙酮酸激酶（PK）活力。

产品信息

组分信息

备注：

1）试剂一：试剂一为混悬液，使用前需混均匀，否则结果会有偏差。

2）试剂二：每支用时加双蒸水1.4 mL，用不完放-25～-15℃以下保存3～7天。(如果样本量少，可以将配好的1.4 mL再分成2～3管放-25～-15以下保存，每次取一管用，以免反复冻融)  

3）试剂四：用时每支加双蒸水320 µL，用不完放-25～-15℃以下保存。

4）试剂五：用时每支加双蒸水650 µL，用不完放-25～-15℃以下保存。

使用说明

1.仪器试剂准备

可调340 nm波长的紫外分光光度计、0.5 cm光径石英比色皿、涡旋混匀器、37℃水浴锅、秒表、蒸馏水、生理盐水、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1）组织样本：

准确称取组织重量按重量（g）:体积（mL）= 1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清再用生理盐水稀释成适当浓度匀浆上清待测，取得的上清液需测蛋白浓度。

2）血清/浆样本：

直接检测。

3.操作表

备注：

因试剂太贵，一般情况下对照管可以不做（对照管很稳定，除非实验精确性要求很高），所以只需做测定管 15分钟前后的吸光度OD值之差。

4.计算公式

1）血清/浆的计算公式：

单位定义：在 37℃，pH 7.6的条件下，每升血清/浆每分钟将1 µmoL的PEP转变成丙酮酸为一个酶活力单位。

丙酮酸激酶活力（U/L）= ΔA ÷（6.22×T×d）×（V反总/V样）×1000

其中，ΔA ：表示吸光度的变化值；6.22：表示是PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）的毫摩尔消光系数；T：表示反应时间，15分钟；d：表示是比色光径，0.5厘米；V反总：表示是反应液总体积，1.195 mL；V样：表示取样量，0.02 mL；

1000是用于将mmol转换为μmol的转换因子。

2）组织的计算公式：

② 按蛋白浓度计算：

单位定义：在37℃，pH 7.6的条件下，每克组织蛋白每分钟将1 µmol的PEP转变成丙酮酸为一个酶活力单位。

丙酮酸激酶活力（U/gprot） = ΔA ÷（6.22×T×d）×（V反总/V样）÷ Cpr

其中：Δ6.22：表示是PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）的毫摩尔消光系数；T：表示反应时间，15分钟；d：表示是比色光径，0.5厘米；V反总：表示是反应液总体积，1.195 mL；V样：表示取样量，为0.02 mL；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，gprot/mL（prot 指蛋白）。

2～8℃保存，有效期3个月。