FuniCut® RsaI限制性内切酶(RsaI酶切序列位点GT/AC)

FuniCut® RsaI

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15084ES60

100 T

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产品介绍

FuniCut^® 系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut^® 系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

产品特色

识别位置	5'-GT↓AC-3' 3'-CA↑TG-5'
推荐反应条件	1×FuniCut^® 缓冲液；37°C孵育
酶活	10 U/μL
失活条件	不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化
同裂酶	AfaI, Csp6I, CviQI, RsaNI
甲基化修饰影响	Dam、Dcm、EcoKI、EcoBI：无影响 CpG：剪切受影响

应用案例

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut^® Buffer或10×FuniCut^® Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL (~1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut^® FokI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

^{*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FuniCut® Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。}

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3) 37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA）。

4) 80℃孵育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。

5) 如果使用FuniCut^® Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可直接上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3. 质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）*
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
10×FuniCut^® Buffer或10×FuniCut^® Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
FuniCut^® FokI	1 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

*如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

4. 不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
150	8	12	5	5	11	4	78

5. 甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	剪切受影响	剪切受影响	无影响	剪切受影响

6. 不同反应缓冲液中的活性*

反应缓冲液	FuniCut^® Buffer	Thermo ScientificFastDigest Buffer	NEBCutSmart^® Buffer	TakaraQuickCut™ Buffer
活性	100%	50%	100%	50%

*活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。

存储条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

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COA