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FuniCut® RsaI限制性内切酶(RsaI酶切序列位点GT/AC)(15084ES)

FuniCut® RsaI
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产品介绍

FuniCut® 系列内切酶是通过基因工程重组技术,可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶,适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut® 系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应体系,另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

产品特色
识别位置5'-GT↓AC-3'
3'-CA↑TG-5'
推荐反应条件1×FuniCut® 缓冲液;37°C孵育
酶活10 U/μL
失活条件不可热失活,请使用酚氯仿抽提或柱纯化
同裂酶AfaI, Csp6I, CviQI, RsaNI
甲基化修饰影响Dam、Dcm、EcoKI、EcoBI:无影响
CpG:剪切受影响


应用案例

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液(冰上操作)

组分质粒DNAPCR产物基因组DNA
ddH2O15 μL16 μL30 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer2 μL3 μL*5 μL
底物DNA2 μL (~1 μg)10 μL (~0.2 μg)10 μL (5 μg)
FuniCut® FokI1 μL1 μL5 μL
Total20 μL30 μL50 μL

*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×FuniCut® Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验,酶切前需纯化PCR产物。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3) 37°C孵育15 min(质粒),或15~30 min(PCR产物),或30~60 min(基因组DNA)。

4) 80℃孵育20 min即可使酶失活,停止反应(可选)。

5) 如果使用FuniCut® Color Buffer进行酶切反应,得到的产物可直接上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种内切酶的用量为1 μL,并根据需要适当扩大反应体系。

2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。

3. 质粒的扩大反应体系

组分体积(20 μL)体积(20 μL)体积(50 μL)*
DNA1 μg2 μg5 μg
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer2 μL2 μL5 μL
FuniCut® FokI1 μL2 μL5 μL
Total20 μL20 μL50 μL

*如果总反应体系大于20 μL,可使用水浴、金属浴或沙浴,并增加孵育时间。

4. 不同DNA中的识别位点数

λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
1508125511478

5. 甲基化修饰影响

DamDcmCpGEcoKIEcoBI
无影响剪切受影响剪切受影响无影响剪切受影响

6. 不同反应缓冲液中的活性*

反应缓冲液FuniCut® BufferThermo ScientificFastDigest BufferNEBCutSmart® BufferTakaraQuickCut™ Buffer
活性100%50%100%50%

*活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。


存储条件

-25~-15℃保存,有效期2年。

COA
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