干货 | 限制性内切酶知多少？

分子克隆作为分子生物学的一项成熟技术，几乎每个实验室都或多或少的会涉及。在分子克隆实验中，限制性内切酶算是克隆必备产品，但大家也常常因为限制性内切酶的各种问题而感到烦扰。比如小编常备问到的：

限制性内切酶种类这么多，不知道如何选择。
酶切不完全或出现乱切、错切的情况。
酶切速度慢，需要1 h甚至过夜酶切。
多酶切还需要选择多款酶切缓冲液。

针对第1个问题，小编会简单介绍一下什么是限制性内切酶，不同内切酶的分类如何，让您对限制性内切酶有一个更全面的认识。针对第2~4个问题，翌圣FuniCut^®系列快速内切酶通过菌株改造，配合优化的工艺，可以轻松解决以上难题！

什么是限制性内切酶？

限制性内切酶是一种能够识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA链中的磷酸二酯键的一类酶，简称限制酶。

不同的限制性内切酶会识别不同的DNA 序列，它可以在识别序列内或距识别序列不远的位置处切割DNA，酶切之后会形成不同类型的产物，如下图1中的BamHI形成5’粘性末端产物，KpnI形成3’粘性末端产物，EcoRV形成平末端产物。

图1.BamHI、KpnI、EcoRV酶切示意图

限制性内切酶的命名

限制性内切酶的命名主要是根据细菌的属名、种名、菌株或血清型、发现的顺序而定，以BstEII为例，命名规则如下表一所示：

表1.限制性内切酶的命名规则

缩写	全名	含义
B	Bacillus	属名第一个字母
st	stearothermophilus	种名前两个字母
E	ET	株系名第一个字母
II	第二个发现	在此类细菌中发现的顺序

限制性内切酶的分类

根据结构的复杂程度、作用方式与辅因子的区别，限制性内切酶可分为四大类，下表二总结了各类的特点和典型酶种。

表2.不同限制性内切酶的区别

内切酶类别	特点	典型酶种
Type I	1、同时具有识别切割和修饰活性； 2、能够识别DNA特定序列，切割位点距离识别位点不定，可达数千个碱基之远； 3、作用时需要ATP。	EcoB、EcoK等
Type II	1、只具有识别切割的作用； 2、识别序列多为短的回文序列（一般为4-8bp），酶切位点通常就是所识别序列，特异性切割； 3、作用时需要Mg²⁺； 4、分子克隆中最常用的一类限制酶。	HindIII，NotI等
Type III	1、同时具有识别切割和修饰活性； 2、切割位点大约距离识别位点24-26bp； 3、作用时需要ATP。	HinfIII等
Type IV	1、仅切割被甲基化修饰了的DNA序列； 2、切割位点大约距离识别位点 30 bp左右。	McrA，McrBC等

除了以上分类，根据识别和切割位点的异同可以分为3类，如下表三所示：

表3.同裂酶、异裂酶和同尾酶对比

	同裂酶	异裂酶	同尾酶
识别序列	相同	相同	不同
切割位点	相同	不同	相同
典型代表	AgeI 与 BshTI：均识别和切割5′-A↓CCGGT-3′	SmaI(5′-CCC↓GGG-3′)与XmaI(5′-C↓CCGGG-3′)	BamHI(5'-G↓GATCC-3')与BglII(5'-A↓GATCT-3')

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