产品简介

 

GSTSep Glutathione Agarose Resin是一种GST标签蛋白纯化树脂，结构上以6%交联的琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高，使其每毫升基质可承载>20 mg GST融合蛋白（40 KDa）。此外，本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。

GSTSep Glutathione Agarose Resin储存在含20%乙醇的1×PBS 中，填料和保护液的比例为1:1，我司官网规格为实际填料的体积。

GST标签蛋白纯化试剂盒 (琼脂糖树脂法)由GSTSep Glutathione Agarose Resin、优化预制的缓冲液、重力层析空柱组成，用于高效、快速纯化GST标签蛋白，为GST标签蛋白的纯化带来了极大的便利。

 

产品信息

 

类别	编号	组分名称	20753ES10	保存方式	翌圣货号
Part Ⅰ	20753-A	GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)	10 mL	2~8℃	20507ES
	20753-B	1x PBS Buffer，PBS 缓冲液(粉末)，PH 7.4，1L	1 L	RT	60158ES
	20753-C	1x TBS Buffer，TBS 缓冲液(粉末)，PH 7.4，1L	1 L	RT	60157ES
	20753-D	Glutathione,Reduced(GSH) 还原型谷胱甘肽(GSH)	2×1瓶 （307 mg/瓶）	2~8℃	60342ES
Part Ⅱ	20753-E	重力层析空柱，5 mL（50 μm）	10×1套	RT	20522ES

 

储存条件

 

2~8℃保存，有效期2年。其中20753-B、20753-C、20753-D可室温保存。

 

使用说明

 

1. 缓冲液配制

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲液：1x PBS Buffer，PBS 缓冲液(粉末)，PH 7.4, 1L（20753-B）, 使用时用蒸馏水或超纯水溶解，定容至1L即可。

10×GSH溶液：1x TBS Buffer，TBS 缓冲液(粉末)，PH 7.4, 1L（20753-C）, 使用时用蒸馏水或超纯水溶解，定容至1L。还原型谷胱甘肽GSH（20753-D），使用时取1瓶（307 mg）用10 mL 1x TBS Buffe溶解并混匀，即为10XGSH溶液。配制好的10XGSH溶液-20℃保存，一年有效。

洗脱缓冲液：按照9:1的比例混合适量1x TBS Buffer和10XGSH溶液。由于GSH在溶液中容易被氧化而失效，洗脱缓冲液宜新鲜配制，配制好的洗脱缓冲液4℃保存，两周内有效。洗脱缓冲液含10 mM GSH。

【注】平衡/洗杂缓冲液或洗脱缓冲液中可加入1-10 mM DTT。

 

2. 样品准备

【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。

1）细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达蛋白为例）

a. 挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。

b. 表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体，然后加入1/10体积的平衡液和PMSF（Cat#20104ES）（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1 mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，如蛋白酶抑制剂Cocktail（用于细菌提取）（Cat#20137ES），但不能影响目的蛋白与树脂的结合。

c. 之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1 mg/mL。【注】如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。

d. 将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

e. 收集上述澄清蛋白液，10000 rpm，4℃离心20-30 min。取上清，0.22 µm/0.45 µm滤膜过滤后，置于冰上备用或-20℃保存。

2) 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白

将细胞培养液转移至离心瓶，5000 rpm离心10 min，收集上清。即可直接上柱纯化；【注】对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经平衡液透析后才能上柱。

3.  GSTSep Glutathione Agarose Resin重力柱的装填

1）取重力层析柱，5 mL（20753-E），装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。

2）将GSTSep Glutathione Agarose Resin（20753-A）混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入重力柱中（填料实际体积占悬液的一半），打开下出口流干保护液。

3）加入适量纯水冲洗填料，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。

4）加入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之间没有空隙，且保持水平。

5）装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡，暂不使用时则加入保护液，4℃保存。

      4.重力柱法纯化

1）将装填好GSTSep Glutathione Agarose Resin的重力柱用5倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下，重复2-3次。

2）将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少2 min，保证样品和填料充分接触，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。

3）用10-15倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）用5-10倍柱体积的洗脱液洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。

5）随后依次用3倍柱体积的平衡液和5倍柱体积的去离子水清洗填料。5倍柱体积的20%乙醇平衡填料，最后将填料保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

      5.SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

6. 填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的6 M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

 

注意事项

 

1. 请勿冷冻保存本产品。
2. GSTSep Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3. 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4. 本产品仅作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20250109