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Strep标签发展史

生物素化蛋白

生物素化 (Biotinylation) 是将生物素以共价键连接到分子 (如氨基酸或蛋白质) 上的过程。由于生物素很小,生物素化通常快速且具有特异性,不易干扰分子固有功能。

 

生物素与链霉亲和素(Streptavidin)具有极高的亲和力、快速性和高特异性,因此,生物素化被广泛应用于生物医学领域,生物素化蛋白作为一种分子工具广泛用于生物技术。

 

Strep-tag蛋白

Strep标签 (Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly)是能与链霉亲和素特异性结合的一种亲和标签。与生物素相比,Strep标签和链霉亲和素间的亲和力较低,因此可以使用生物素衍生物(Diaminobiotin),进行在生理条件下的温和洗脱。但Strep标签仅能接在目标蛋白的C端,对于需将标签接在N端或是蛋白内部的实验,非常的不实用。

 

Strep-tag 蛋白

经过进一步的优化后,得到了现在被广泛使用的Strep-tag Ⅱ(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)。Streptactin作为优化后的链霉亲和素,Streptactin:Strep-tag Ⅱ的亲和力较Streptavidin:Strep-tag Ⅱ提升了近100倍,这个改变使得洗脱时需改用脱硫生物素(Desthiobiotin) ,但过程一样温合。Strep-tag Ⅱ逐渐被广泛应用于纯化或检测蛋白质中,还甚至发展出细胞分离检测的方法。

 

Twin-Strep-tag蛋白

研究者们利用总结合力(Avidity)的原理,将两个Strep-tag Ⅱ以linker连接在一起,称作: Twin-Strep-tag。这一新标签的出现再度提升了目标蛋白与Streptactin的链接强度,改善了低浓度样本纯化效果,还能于捕捉蛋白复合体、检测蛋白间的相互作用。

 

产品简介

填料名称

Streptavidin Agarose Resin 6FF

Streptactin Agarose Resin 6FF

基质

高度交联的6%琼脂糖微球

粒径

45-165 μm

配体

Streptavidin

Streptactin

载量/mL介质

>200 nmol Biotin

3-5 mg Twin Strep-tag II蛋白

产品应用

1、生物素或生物素化物质的纯化;如固定生物素化抗体纯化抗原,或固定生物素化蛋白纯化抗体; 2、亚氨基生物素标签物质的纯化。

1、可用于Strep-Tag II标签蛋白纯化; 2、可用于Twin Strep-Tag II标签纯化。

优劣势

1、链霉亲和素相对于亲和素的优点是,显著降低非特异性吸附;其对生物素的结合能力与亲和素相当; 2、链酶亲和素与生物素结合非常牢固,只有将这些物质变性后才能从填料上洗脱下来。而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在非变性的条件下洗脱。

1、纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性強、兼容多种表达系统,对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助; 2、对洗脱试剂有一定的要求,D-脱硫生物素与Streptactin结合后能用HABA竞争取代,再生前后载量变化较小;而D-生物素与Streptactin结合紧密,无法用HABA完全竞争取代,高浓度氢氧化钠洗脱后载量只能达到初始载量的50%左右。

表1.Streptavidin and Streptactin Agarose Resin 6FF对比

 

产品测试

图1.Streptactin Agarose Resin 4FF纯化strep tag Ⅱ跑胶图
1:marker;2:样品;3:流出液;4:洗脱液
纯度>98%
 

产品信息

产品名称

产品编号

规格

Streptactin Agarose Resin 4FF(Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂)

20495ES08

5 mL

20495ES25

25 mL

20495ES60

100 mL

Streptavidin Agarose Resin 6FF 链霉亲和素琼脂糖纯化树脂

20512ES08

5 mL

20512ES25

5 mL×5

20512ES60

100 mL

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML

生物素分子纯化预装柱,1ML

20513ES03

1 mL

20513ES08

1 mL×5

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML

生物素分子纯化预装柱,5ML

20514ES08

5 mL

20514ES25

5 mL×5

Streptavidin (SAV) MagBeads 链霉亲和素(SAV)免疫磁珠

47503ES03

1 mL

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