推荐应用
百日咳毒素(胰岛激活蛋白)是一种从B. pertussis中分离出来的毒素,已被证明可以催化大鼠C6神经胶质瘤细胞膜中蛋白质的ADP-核糖基化。实验表明,百日咳毒素可阻断抑制性激素降低腺苷酸环化酶活性的能力,并增强刺激性激素激活酶的能力。这种毒素由亚基 A(活性)启动子和 B(结合)寡聚体组成,前者通过ADP核糖基化真核G蛋白破坏跨膜信号传导,后者帮助毒素与体内细胞结合。
产品冻干于含氯化钠和磷酸钠的缓冲盐中,当用0.5 mL水复溶时,体系中含50 μg百日咳毒素、0.01 M磷酸钠、0.05 M氯化钠,pH值为7.0。产品以无菌包装的冻干粉形式提供,在真空下密封,无需使用滤器进行无菌过滤,以免造成损耗。
百日咳毒素(Pertussis Toxin,PTX)是一种多组分蛋白质,由六个非共价结合的亚基(S1、S2、S3、S4和S5)组成,在天然百日咳毒素中以1:1:1:2:1的比例存在。本产品是一种天然的百日咳毒素,包含全部五个亚基,纯度极高,在钙调蛋白存在条件下腺苷酸环化酶活性极低。
百日咳毒素通过破坏血脑屏障(BBB)通透性,促进外周免疫细胞进入中枢神经系统(CNS),从而增强自身抗原的免疫应答。
用百日咳毒素Pertussis Toxin构建自身免疫性疾病的动物模型:将百日咳毒素与髓鞘抗原共同注射至小鼠体内,可建立多发性硬化症及实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的小鼠模型(信息来源于文献,仅供参考,具体请根据实际实验情况进行相应调整):
1. 实验动物准备
品系:C57BL/6小鼠(雌性居多)
周龄:6-10周龄
体重:20-25 g或16-18周龄、体重>20 g
2. 免疫原配制
髓鞘抗原:MOG₃₅₋₅₅多肽
佐剂:完全弗氏佐剂(CFA)+ 灭活结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Ra)
抗原量:每只小鼠 50-300 μg MOG₃₅₋₅₅
乳化比例:MOG/CFA 通常为 1:1混合
3. 皮下注射步骤
注射部位:背部多点或两后腿足垫
注射体积:每个点位 50-100 μL
注射方式:将MOG-CFA乳剂进行皮下(s.c.)注射
4. 百日咳毒素Pertussis Toxin给药方案
第0天(免疫同时),剂量:150-300 ng,途径:i.p./i.v.
第2天/48小时后,剂量:150-300 ng,途径:i.p.
注射方法:腹腔注射(intraperitoneal, i.p.)最为常用,部分研究采用静脉注射(tail vein)。
5. 发病评价时间
潜伏期:免疫后 9-14天开始出现临床症状
高峰期:3-5天后达到高峰
总观察期:约 4周可维持慢性瘫痪状态
典型常用的参考配方示例:
1. 最常用方案:
MOG₃₅₋₅₅:10 μg溶于PBS
CFA含40 mg M. tuberculosis H37Ra
PTX:200 ng/只,第0天和第2天i.p.各一次
2. 高剂量方案:
MOG₃₅₋₅₅:300 μg溶于CFA
PTX:300 ng/只,第0天和第2天i.p.各一次
3. 低剂量方案:
MOG₃₅₋₅₅:50 μg溶于PBS+CFA
PTX:100 ng/只(特殊品系可用200 ng),第0天和第2天i.p.各一次
2~8℃保存,有效期3年,不要冷冻。产品轻拿轻放,不要涡旋振荡。
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