10148ES产物有突变是什么原因？
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2026-08-24
原因 1：模板突变。 1.原始模板序列有突变。
原因：原始模板序列有突变会使扩增产物的突变位点恒定，表现在多个克隆测序发生突变，且突变位置恒定。
判断方法：将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序，测序结果与模板序列对比，发生突变且位置恒定，可认为是模板序列发生突变。
优化方法：更换序列正确的模板。2.保存不当突变。
原因：反复冻融或长时间紫外照射可能导致模板发生断裂或突变，突变位置不定。
判断方法：将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序，测序结果与模板序列对比，发生突变且位置不定，可认为是因保存不当导致模板发生了突变。
优化方法：尽量减少模板的反复冻融或紫外照射。原因 2：酶保真性差。
DNA 聚合酶保真性差，导致突变的概率大，在长片段扩增中更常见。
判断方法：将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序，模板不突变。以模板扩增得到的产物进行克隆测序后发生突变，且突变位置不恒定，可认为是 PCR 过程中发生的突变， 常是由于酶保真性差导致。
优化方法：更换成保真性更高的产品。注：保真性高低代表突变概率的高低，保真性再高的产品均不能完全避免突变。
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