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产物突变?

产物突变?

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2026-10-10

原因 1:模板突变。 1.原始模板序列有突变。 原因:原始模板序列有突变会使扩增产物的突变位点恒定,表现在多个克隆测序发生突变,且突变位置恒定。 判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,测序结果与模板序列对比,发生突变且位置恒定,可认为是模板序列发生突变。

优化方法:更换序列正确的模板。

2.保存不当突变。

原因:反复冻融或长时间紫外照射可能导致模板发生断裂或突变,突变位置不定。

判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,测序结果与模板序列对比,发生突变且位置不定,可认为是因保存不当导致模板发生了突变。

优化方法:尽量减少模板的反复冻融或紫外照射。

原因 2:酶保真性差。

DNA 聚合酶保真性差,导致突变的概率大,在长片段扩增中更常见。

判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,模板不突变。以模板扩增得到的产物进行克隆测序后发生突变,且突变位置不恒定,可认为是 PCR 过程中发生的突变, 常是由于酶保真性差导致。

优化方法:更换成保真性更高的产品。注:保真性高低代表突变概率的高低,保真性再高的产品均不能完全避免突变。

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