活细胞溶酶体pH检测探针 LysoSensor Yellow/Blue DND-160
6
2026-05-22
背景介绍
溶酶体是细胞内最终降解大分子物质的亚细胞器，在许多细胞生理过程中发挥着关键作用，如细胞内吞、细胞生长和凋亡、自噬、离子代谢、氧化应激、细胞内转运、质膜修复和外泌体释放等。同时越来越多的证据表明溶酶体也参与各种病理过程，包括炎症、癌症和神经退行性疾病。溶酶体是真核细胞中的酸性细胞器，其内部含有大量消化酶在溶酶体特殊的弱酸性微环境下(pH约为4.5-5.5)具有极高的催化活性， 当pH升高酶活降低，导致底物蓄积；pH异常亦可破坏膜稳定性并诱发炎症或凋亡。溶酶体具有高度动态性，它们不断改变其形态和空间分布，因此长期和实时跟踪溶酶体的运动和形态变化不仅有助于了解其工作状态，还可对预防和治疗溶酶体功能障碍相关疾病提供新的研究方法。
产品简介
LysoSensor探针是细胞内的pH荧光指示剂，可通过质子化作用聚集在酸性细胞器内。LysoSensor Yellow/Blue DND-160 为比率型探针，适合用于对溶酶体进行pH定量检测。该探针在中性环境下以蓝色荧光为主，在酸性环境下以黄色荧光为主。
LysoSensor Yellow/Blue DND-160 的 pKa 为 4.2，检测范围为3.5-6.2。
图1、随着pH的升高，340nm/380nm的比值也随之增加
检测操作
一、检测前准备：
①溶酶体pH标准液（可自行配置，也可订购成品），pH范围推荐3.5-6.0
②Nigericin 尼日利亚霉素（用于搭配pH标准液）
③细胞
④全波长荧光酶标仪/激光共聚焦显微镜
⑤96孔黑色细胞培养板
其它试剂：无水DMSO、PBS 缓冲液、培养基、FBS等
注：请一定留意激发和发射参数Ex/Em=329 nm/440nm(激发/发射） 、Ex/Em=384 nm/540 nm（激发/发射），需提前确认仪器是否适用。
二、LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO) 探针孵育
①接种细胞
提前一天将3×10^4个细胞接种于96孔板中，需留意不同细胞接种数量不同，用于绘制标曲的孔和待检测的样本孔在一个96孔板上。
注意：标准液及样本检测建议至少3个复孔；黑色96孔板。
②探针的孵育
检测当天将LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)原液按照1:1000稀释为1μM工作液。
注意：稀释液可以是PBS或者基础培养基等；对于不同细胞工作浓度不同，可高于1μM，如2-5μM。
将染色工作液于37℃提前预热后加入到孔板中，37℃孵育1-5min。
注：因为该探针为碱性探针，随着孵育时间的延长会导致溶酶体被碱化导致pH升高，故在定量检测中孵育时间应较短，为1-5min。
孵育完成后弃掉染色液，用 1X PBS 洗涤细胞两次，然后将细胞置于 100 μl的 1X PBS 或培养基中。
③加入溶酶体pH标准液进行检测
先用对应的pH标准液冲洗每个细胞培养孔一次，再加入各自对应的 pH标准液37℃孵育10 分钟。 孵育完成后不需清洗，可立即进行检测。
孵育时可进行全波长荧光酶标仪/激光共聚焦显微镜的参数设置：选择荧光检测模式，蓝光检测参数为329/440nm，黄光检测参数为384/540nm。
注：待测细胞样本中加入探针清洗后不加溶酶体pH标准液，而是加入培养基。
④标准曲线绘制及计算
计算蓝光/黄光（440/540nm；329/380nm)的荧光比值，以pH值为横坐标，以荧光比值为纵坐标绘制标准曲线，根据公式代入被测细胞样本的荧光比值ratio计算溶酶体pH。如下为孵育不同时间对应的标准曲线以及检测的细胞pH值：
图2、使用LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO) 测定HAP1细胞溶酶体pH
参考文献:
Ma L,Ouyang Q,Werthmann GC, et al. Live-cell Microscopy and Fluorescence-based Measurement of Luminal pH in Intracellular Organelles. Front Cell Dev Biol. 2017;5:71. doi:10.3389/fcell.2017.00071
相关溶酶体探针产品
|
产品名称 |
货号 |
产品形式 |
Ex/Em（nm） |
|
液体 |
504/511 |
||
|
液体 |
577/590 |
||
|
液体 |
443/505 |
||
|
液体 |
329/440 389/540 |
