树突状细胞（Dendritic Cells，DC)是人体内最有效的抗原递呈细胞，是连接先天免疫与适应性免疫的桥梁。然而，其在体内数量稀少，难以直接获取，这极大地限制了DC的研究和应用。但DC能从不同组织里的DC前体细胞分化、诱导而来, 如骨髓液的前体细胞，外周血和脐带血的单核细胞。对于人，由于人外周血的取材最为方便且单核细胞数量最多，所以最常用的方法是从人外周血单个核细胞(PBMC)诱导DC。
本细胞因子套装包含重组人GM-CSF、人IL-4、人IL-6、人TNF-α和人IL-1β。IL-4 能够抑制单核细胞向CD14+巨噬细胞分化，从而诱导其分化为未成熟DC。若培养体系中不加 IL-4，单核细胞将分化为巨噬细胞。GM-CSF，能够诱导单核细胞或DC前体细胞向DC分化，并促进DC的增殖和存活。GM-CSF还可以提高DC表面抗原水平，增强DC的抗原捕获和处理能力。GM-CSF和IL-4共同作用可使单核细胞定向分化为未成熟DC。TNF-α/IL-1β/IL-6 三因子组合可诱导DC的完全成熟。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 92670ES70 | 92670ES80 |
| 92644ES-A | Recombinant Human GM-CSF | 20 μg | 100 μg |
| 92644ES-B | Recombinant Human IL-4 | 10 μg（2×5μg） | 50 μg |
| 92644ES-C | Recombinant Human IL-6 | 10 μg | 50 μg |
| 92644ES-D | Recombinant Human TNF-α | 10 μg | 10 μg |
| 92644ES-E | Recombinant Human IL-1β | 10 μg | 10 μg |
产品信息
| 组分原货号 | 产品名称 | 来源 | 外观 | 参考浓度 |
| 91102ES | Recombinant Human GM-CSF | E.coli | 冻干粉 | 100ng/mL |
| 90105ES | Recombinant Human IL-4 | E.coli | 冻干粉 | 50 ng/mL |
| 90107ES | Recombinant Human IL-6 | E.coli | 冻干粉 | 50 ng/mL |
| 90635ES | Recombinant Human TNF-α | E.coli | 冻干粉 | 10 ng/mL |
| 90101ES | Recombinant Human IL-1β | E.coli | 冻干粉 | 10 ng/mL |
人外周血单核来源树突状细胞的制备
1. PBMC复苏
复苏冻存的PBMC，室温300g离心5min。弃去上清，使用完全培养基RPMI 1640（含10% FBS和1%双抗）重悬细胞，并进行细胞计数与活率检测（活率应大于95%）。
2. 单核细胞分选
方法A:贴壁纯化法（简便，适合常规实验）
1) 铺板：将分离得到的单个核细胞用含血清的完全培养基重悬，调整细胞密度至约 1×106−2×106细胞/毫升，接种于6孔培养板中。
2) 贴壁：将培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中静置培养2小时。此步骤利用单核细胞易贴壁的特性，使其与悬浮的淋巴细胞分离。
3) 去悬浮：轻轻吸弃培养基中的悬浮细胞（主要为淋巴细胞），并用温热的PBS轻轻洗涤培养孔1-2次，剩余的紧密贴壁细胞即为单核细胞。
方法 B：CD14 磁珠分选法（高纯度，适合功能实验）
1) 重悬：PBMC 调整浓度至 1×10⁸ cells/mL，用预冷分选缓冲液洗涤1次（4℃，300×g，8 min）。
2) 磁珠标记：将PBMC细胞加入分选磁珠，4℃孵育 30 min，轻柔混匀。
3) 磁分离：分选柱用3倍体积分选缓冲液润洗，加入细胞悬液，收集未结合细胞；用分选缓冲液洗柱3次，洗脱结合的 CD14⁺单核细胞（纯度≥95%）。
3. 单核细胞诱导为未成熟树突状细胞
3.1 接种：用完全培养基RPMI 1640（含10% FBS和1%双抗）将分选后的CD14+细胞浓度调整至1-2×106 cells/mL。按每孔1mL接种于24孔板中。
3.2 诱导：立即加入重组人细胞因子IL-4（50ng/mL）和GM-CSF（100ng/mL），将24孔板置于37℃、5% CO2的培养箱中开始培养；
3.3 观察：培养48h后，在显微镜下观察细胞状态。
3.4 换液：若细胞贴壁良好：轻柔吸弃一半旧培养基，再缓慢加入等体积、含有相同浓度IL-4和GM-CSF的新鲜完全培养基；若细胞贴壁不佳或大量悬浮：无需弃去旧液，直接补加适量含有相同浓度细胞因子的新鲜完全培养基。继续培养：完成换液/补液后，将细胞继续培养72小时。形态观察：出现典型树突状突起，为未成熟 MoDC（iMoDC）。
4. 未成熟树突状细胞诱导为成熟树突状细胞
4.1 换液：轻柔吹打收集的上述未成熟树突状细胞，300g离心10分钟。弃去上清。用新鲜完全培养基重悬细胞，并将密度调整至5×105cells/mL。
4.2 接种： 将细胞悬液接种至新的24孔板中，并加入成熟诱导因子混合物：TNF-α（10 ng/mL）、IL-1β（10 ng/mL）、IL-6（50 ng/mL）和PGE2（1μg/mL）。将细胞置于37°C、5% CO₂培养箱中继续培养48小时。培养结束后，即可获得成熟的树突状细胞，用于后续实验。
4.3 形态观察：随着细胞成熟，细胞会逐渐变成悬浮状态，细胞体积增大，表面突起变得更加细长、明显，呈典型的“树突状”。
5. 细胞收获与鉴定
5.1 收获：收集上清中的悬浮细胞，贴壁残留细胞用预冷 TrypLE Express 消化 5 min，轻轻吹打收集，合并后用 PBS 洗涤 2 次（300×g，10 min）。
5.2 计数与活力：台盼蓝染色，活细胞率需≥85%。
5.3 表型鉴定（流式细胞术）
未成熟DC标志：CD11c⁺、CD14⁻、CD80⁻/low、CD86⁻/low、MHC II⁺、CD83⁻。
成熟DC标志：CD83⁺、CD80⁺、CD86⁺、HLA-DR⁺（MHC II）、CD14⁻。
1. 省心便捷：无需单独采购多种细胞因子、反复摸索配比，开箱即用。
2. 黄金配比：5种细胞因子最佳浓度配比，协同增效，高效扩增、分化细胞。
3. HiActi®细胞因子：严格活性验证，蛋白纯度>98%，内毒素<0.1EU/μg。
4. 高性价比：比单买更省
5. 标准Protocol: 含细胞接种、因子添加、成熟诱导全流程。
-25 ~ -15℃保存，收到货之日起，有效期1年。复溶后，无菌条件下，2~8℃保存，7天有效期。复溶后， 无菌条件下，-85 ~ -65℃保存，3个月有效期。
