Antarctic Phosphatase（简称Anp）来源于重组表达的南极细菌不耐热碱性磷酸酶， 以同源二聚体和单体为常见形态。可非特异性催化 DNA 和 RNA 的 5´ 和 3´ 末端磷酸单酯的去磷酸化，水解核糖核苷酸和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。该酶在 75℃ 下加热 5 分钟即可完全且不可逆地失活，因此无需在连接或末端标记前去除。此外，该酶还可用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。
- 快速去磷酸化: 37℃孵育15 min即可完成反应；
- 快速失活: 75℃处理5 min即可完全不可逆失活；
- 使用便捷: 在多种内切酶和PCR缓冲液中保持活性，可与质粒DNA酶切同步进行；
- 兼容性强: 适用于5’或3’突出末端、平端等各类DNA末端，操作步骤统一，便于后续连接反应。
- 快速失活: 75℃处理5 min即可使酶完全失活
分别将AnP在75℃处理5 min（黄色）后，以pNPP为底物进行酶活测定，结果显示75℃处理5 min即可实现完全失活。
图1. 翌圣AnP灭活条件验证
- 性能验证：Anp对酶切后载体进行脱磷处理可以大大降低载体酶切后的自连率
单酶切转化验证：将pUC19质粒经HindIII单酶切后，用AnP在37℃下处理15min，再于75℃灭活5min。经T4 DNA连接酶连接并转化至DH5α感受态细胞后，载体自连率显著降低，背景转化子明显减少。
图2. 翌圣AnP对单酶切后载体脱磷降低自连率验证
双酶切转化验证：pUC19质粒经HindIII/NdeI双酶切过夜后，使用翌圣Anp在37℃条件下脱磷处理15 min，随后75℃灭活5 min。加入经HindIII/NdeI双酶切后332 bp的PCR产物片段，用T4 DNA连接酶进行连接并转化DH5α。从该平板挑取7个单克隆，利用pUC19特异性引物进行菌落PCR验证。结果显示载体自连率显著降低，背景转化子明显减少。
图3. 翌圣AnP对双酶切后载体脱磷降低自连率验证
- 切口酶、核酸外切酶、DNase和RNase残留低
经琼脂糖凝胶电泳检测，三批次AnP与核酸底物共同孵育后，电泳条带清晰、单一，未见降解或拖尾现象。结果表明，该产品纯度极高，切口酶、核酸外切酶、DNase和RNase残留极低，可有效保障实验结果的准确性与可靠性。
图4. 翌圣AnP切口酶、核酸外切酶、DNase和RNase残留检测结果
-25~-15℃储存，有效期2年。
