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Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
| 来源(Source) | 携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母 |
| 质量控制(Quality Control) | 无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
| 热灭活(Thermal Inactivation) | 在螯合剂存在下,65℃加热30 min,99%活性不可逆丧失;使用苯酚,可使酶完全失活。 |
| 储存液条件(Storage conditions) | 10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM ZnCl2,50% glycerol。 |
| 活性定义(Unit definition) | 在pH 9.8,37℃条件下,以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物,1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
| 最佳pH(Optimal pH) | 该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10,在底物浓度低时,最佳pH为8,此时该酶活性较高浓度底物时稍低。 |
| 优化体系(Optimal Buffer) | AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM MgCl2) |
干冰运输。-20℃保存,有效期18个月。
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