Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶
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10321ES80
1000U
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Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品特色
| 来源（Source） | 携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母 |
| 质量控制（Quality Control） | 无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
| 热灭活（Thermal Inactivation） | 在螯合剂存在下，65℃加热30 min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。 |
| 储存液条件（Storage conditions） | 10 mM Tris-HCl（pH8.0），1 mM MgCl2，50 mM KCl，0.1 mM ZnCl2，50% glycerol。 |
| 活性定义（Unit definition） | 在pH 9.8，37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐（p-nitrophenylphosphate）为底物，1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
| 最佳pH（Optimal pH） | 该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。 |
| 优化体系（Optimal Buffer） | AP Buffer（500 mM Tris-HCl pH9.0，10 mM MgCl2） |
存储条件
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
FAQ
Q: 小牛肠碱性磷酸酶和虾碱性磷酸酶的差异是什么？
A：小牛肠碱性磷酸酶（CIAP）和虾碱性磷酸酶（SAP）都可以去除载体或片段的5’-末端磷酸基团，但失活方法不同。
小牛肠碱性磷酸酶，在底物浓度高时，CIAP的最适pH约为10；底物浓度低时，最适pH约为8，但特异性比高底物浓度时低。同时，其在保存条件下极其稳定，但在螯合剂存在条件下，经65℃、30分钟加热处理99%的活性不可逆失活。失活处理时，建议试用苯酚，从而使酶完全失活。
虾碱性磷酸酶，可以在65℃ 加热 5 分钟的条件下不可逆失活。同时，在进行去磷酸化反应之后，不需要纯化产物，可直接用于后续的连接反应。虾碱性磷酸酶也可以用来降解PCR反应中的游离dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。同样无需纯化，可直接用于下游实验。
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