MolPure^® Endo-free Plasmid Mini Kit 适用于从 1-10 mL 大肠杆菌LB培养液中快速提取20-50 µg纯净的质粒DNA，具有高效、快速、方便等特点。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，配合本公司独特的裂解液配方可以最大限度的回收高纯度DNA。提取的DNA纯度高，内毒素残留极低(<0.1EU/μg DNA)，细胞转染效果极佳，也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

稳定性好：离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

快速、方便：30 min可从1.5-5 ml大肠杆菌LB（Luria-Bertani）培养液中，可快速提取多达20-50 µg纯净的高拷贝质粒DNA。

纯净：独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），细胞转染效果极佳。

图 分别使用19021、O品牌、T品牌的试剂提取质粒。之后293细胞，分别瞬转O品牌、Yeasen、T品牌抽提的pEGFP-C1质粒，72h观察荧光。

结果表明转染效率Yeasen＞T品牌＞O品牌

Part I组分-15~-25℃保存；Part II组分2~8℃保存；Part III组分室温保存。有效期2年。

Q：加入去内毒素试剂后，溶液没有变得浑浊？

A：可能是本身内毒素低，也可能是加入 ER 溶液后，因为体系的 PH 差异、抑制物等，使得内毒素的凝集状态反应不一样。

Q：无内毒素质粒小提检测浓度很高？

A：客户的菌液量用了 20ml，太多了，导致 RNase 作用不足。

Q: 质粒浓度低

A: （1）拷贝数低或者大于10kb的质粒应加大菌体使用量，并按比例增加后续buffer的用量；（2）细菌可能没有充分裂解。

Q: 裂解液有沉淀

A: 裂解液中含有NaOH，可能盐离子析出，可 37℃温浴复溶至溶液澄清再使用。 ​

Q：质粒跑胶出现小于100bp小条带

A：可能RNA未去除干净（样本太多或者添加了RNase的缓冲液 RS酶活下降）或者裂解时间太长导致质粒受到破坏。

Q: 内毒素清除离心后分层不彻底

A: 提升离心温度；加大离心转速；增加离心时间。

Q: 提取的产量低

A: 中低拷贝质粒：长片段、表达型载体常以低拷贝为主，建议加大菌体使用量，菌液过夜培养；

菌种问题：菌种保存中质粒丢失，养菌前先划线活化，稳定产量；

菌体未充分裂解：在buffer种充分重悬，避免成团；

试剂准备有误：有沉淀析出的溶液需要加热；加入的乙醇体积不准；

洗脱不充分：洗脱液预热，二次洗脱。

Q: 有基因组污染

A: 培养时间太长：培养时间建议控制在12-16h；裂解不充分。

Q: 下游结果不理想

A: 盐离子污染；乙醇污染；质粒降解；层析柱膜脱落。

[1] Han P, Cao P, Yue J, et al. Knockdown of hnRNPA1 Promotes NSCLC Metastasis and EMT by Regulating Alternative Splicing of LAS1L exon 9. Front Oncol. 2022;12:837248. Published 2022 Jun 23. doi:10.3389/fonc.2022.837248(IF:5.738)
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