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Aureobasidin A(AbA)金担子素A
产品货号:60231ES03
产品规格:1 mg
产品价格:¥1366.00
类别:抗生素

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Aureobasidin A(AbA)金担子素A

    60231ES03

    1 mg

    1366.00

    Aureobasidin A(AbA)金担子素A

    60231ES08

    5×1 mg

    4266.00

    Aureobasidin A(AbA)金担子素A

    60231ES10

    10×1 mg

    7676.00


    产品描述

    金担子素AAureobasidin AAbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1-0.5 μg/mL)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1 基因,以及构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性,如AUR1-C基因。

    AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。本品为溶于甲醇的AbA溶液,浓度为1 mg/mL。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度(见表1. AbA对各种酵母菌的最低抑菌浓度(MIC))。


    产品性质

    分子式(Formula)

    C60H92N8O11

    分子量(Molecular   weight)

    1100   g/mol

    纯度(Purity)

    ≥95%

    熔点(Melting   point)

    155-157℃

    结构式(Structure)

    blob.png


    运输和保存方法

    冰袋运输。2-8℃保存,有效期2年。


    操作步骤(抗AbA的酵母转化系统)


    1. 加入0.5 mL过夜培养的酵母到50 mL YPD培养基中(配方:1 L液体培养基含有10 g yeast extract,20 g polypeptone,20 g D-glucose;固体培养基另外加入2%琼脂)。

    2. 30℃培养约6小时,测定OD660为1~2。使用二倍体时,测定OD660为2~4。

    3. 1,000×g离心5分钟。
    4. 用10 mL Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)悬浮沉淀,1,000×g离心5分钟。

    5. 用Solution A重悬沉淀,直到OD660为150。

    6. 在管内分取100 µL细胞悬浮液,30℃培养1小时。

    7. 加入5 µg载体(环状或线性DNA)和150 µg Carrier DNA(已经过100℃加热10分钟,并迅速冷却)。

    注:pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。

    8. 加入850 µL Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 mL Solution A充分溶解,需要现用现配),轻轻混匀。

    9. 30℃培养30分钟后,42℃培养15分钟。

    10. 室温放置10分钟。

    11. 5,000 rpm离心1分钟,用5 mL YPD培养基悬浮沉淀。

    12. 30℃培养6小时~过夜。

    13. 5,000~10,000 rpm离心,用1-10 mL 0.9% NaCl悬浮沉淀。
    14. 在YPD选择培养基平板(含一定浓度的AbA,依菌株类型而定)上接种100 µL细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。

    15. 挑取阳性转化子,和/或测定转化效率(以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示)。


    注意事项

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2. AbA的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异,可根据最低抑菌浓度(MIC)来确定。

    表1 Aureobasidin 对各种酵母菌的最低抑菌浓度

    菌株

    MIC(µg/mL)

    S.cerevisiae

    ATCC9763(diploid)

    0.2-0.4

    SH3328(haploid)

    0.1

    Sake yeast(diploid)

    0.1-0.2

    Shochu yeast(diploid)

    0.1

    Beer yeast(triploid or tetraploid)

    0.1

    Baker’s yeast(diploid)

    0.2-0.4

    Schizo.pombe

    JY-745(monoploid)

    0.1

    C.albicans

    TIMM-0136(diploid)

    0.04

    C.tropicalis

    TIMM-0324(diploid)

    0.08

     

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    HB181205