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一文Get常见外泌体分离方法

14331

2021-11-22

外泌体是直径为30-150 nm的小细胞外囊泡。在生理和病理条件下,几乎所有类型的细胞都可以释放外泌体,在细胞通讯和表观遗传调控中发挥重要作用。外泌体天然存在于体液中,包括血液,唾液,尿液和脑脊液等,内部含有其来源细胞的核酸,蛋白等物质,因此基于外泌体的疾病诊断和治疗方法得到了深入的研究。但是如何拿到纯净的外泌体一直是外泌体研究所面临的难题之一,因此研究人员也开发了许多外泌体分离的方法,来一起看一下吧。

 

常见外泌体分离方法

01
差速离心法

离心力从300×g到100,000×g的下进行多次循环离心,最后收集外泌体颗粒。

差速离心法.jpg
02
密度梯度离心法

等密度梯度超速离心法是通过从下到上逐步降低密度分层(A)。动区梯度超速离心法由两个梯度介质部分组成,样品根据密度/质量/大小被依次分离(B)。

密度梯度离心.jpg
03
超滤法

超滤的外泌体分离示意图。(A)串联配置的微滤器,细胞外液通过串联配置的微滤器收集外泌体。(B) 顺序超滤,细胞外液依次通过不同直径的过滤器收集外泌体。

超滤法.jpg
04
切向流过滤
在切向流过滤过程中,进料流与膜面平行流动,施加的压力使一部分水流根据过滤器的大小通过膜从而分离外泌体。
切向流过滤.jpg
05
尺寸排阻层析
尺寸排除层析法的外泌体分离,溶液通过固定相,分子根据大小尺寸进行分离。

尺寸排阻层析.jpg

06
聚合物沉淀
聚合物沉淀含有外泌体的溶液中加入高亲水性聚合物后,降低外泌体的溶解度并诱导其随后的沉淀。
聚合物沉淀.jpg
 
07
免疫亲和捕获
基于免疫亲和的外泌体分离示意图。识别外泌体特异性标志物的抗体和外泌体的流体一起孵育富集外泌体,通过额外的洗脱步骤收集外泌体。
免疫亲和捕获.jpg
08
微流体
集成微流体技术结合了外泌体分离和分析,将含外泌体的流体添加到介质中后,根据细胞外囊泡的物理和生化特性,分离外泌体,可以从少量体液中快速分离外泌体,并进行实时外泌体表征分析以进行原位诊断。
 
微流体.jpg
 
 

外泌体分离方法比较

01
差速离心法
优点:低成本低试剂污染,适合大量制备。
缺点:费时费力,有设备要求,易有蛋白质聚集影响纯度,不适合少量样本。
02
密度梯度离心法
优点:纯度高,可以分离外泌体亚群
缺点:设备要求高,费时间,不适合少量样本
03
超滤分离
优点:成本低,速度快
缺点:纯度一般,剪切应力可能造成外泌体损伤,滤膜可能会导致外泌体损失
04
尺寸排阻分离
优点:高纯度,耗时短,保持外泌体的天然状态,良好的重复性,样本量适用范围广,样本类型适用范围广
缺点:成本高,需要额外的外泌体富集方法
05
聚合物沉淀
优点:操作简单,样本量适用范围广,效率高。
缺点:蛋白质聚集合其他囊泡的污染,可能影响后续的分析和量化
06
免疫亲和捕获
优点:适用于特定来源的外泌体,纯度高,方便,无试剂污染
缺点:抗体成本高,外泌体标记需要筛选优化,产量低,洗脱可能会损伤外泌体结构
 
07
微流控技术
优点:高效方便,可实现自动化并和诊断
缺点:只适合小样本分离
 
 

翌圣生物外泌体分离试剂盒,为你提供简单,快速,高效的外泌体分离办法,只需要简单4步,就可以从血液,细胞上清,脑脊液,唾液,腹水,羊水等多种样品中分离出大量形态完好的外泌体。

 

翌圣生物外泌体分离试剂盒.jpg

 

分离产物经过电镜分析,NTA粒径分析和WB实验三大外泌体金标准验证,满足您的下游实验需求。

 

分离产物经过电镜分析.jpg

 

产品信息

 

产品名称

货号

规格

Hieff® exosome tracker kit (for red fluorescence)外泌体红色荧光示踪试剂盒

40780ES

20 µL

Hieff® exosome tracker kit(for green fluorescence)外泌体绿色荧光示踪试剂盒

40781ES

20 µl

Hieff® Quick exosome isolation kit(for Cell Culture Media) 细胞培养上清外泌体快速抽提试剂

41201ES

25 mL/50 mL

Hieff® Serum-free medium(for exosome) 外泌体专用无血清培养基

41210ES

50 mL/500 mL

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus(for Cell Culture Media) 细胞培养上清外泌体快速提取分离试剂盒

41205ES

10 T/20T

Hieff® Quick exosome isolation kit Plus(for Serum/Plasma) 血清/血浆外泌体快速提取分离试剂盒Plus

41206ES

30 T

Hieff® Quick exosome isolation kit(for Serum/Plasma)血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒

41202ES

30 mL

Exosome identification kit for Western Blot 外泌体鉴定试剂盒

41203ES

5 T

Hieff® High Purity Exosome isolation kit(For Serum/Plasma)高纯度血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒

41216ES

10 T/20 T

Exosome-depleted Fetal Bovine Serum 无外泌体胎牛血清

40139ES

50 mL

Calnexin Rabbit pAb

31293ES50/60

50 μL/100 μL

CD9 Rabbit pAb

30039ES50/60

50 μL/100 μL

CD9 Rabbit mAb

31514ES50/60

50 μL/100 μL

CD63 Rabbit pAb

30009ES50/60

50 μL/100 μL

CD63 Rabbit mAb

31513ES50/60

50 μL/100 μL

CD81 Rabbit mAb

31428ES50/60

50 μL/100 μL

Hsp70 1A Mouse mA

30011ES50/60

50 μL/100 μL

TSG101 Rabbit pAb

30010ES50/60

50 μL/100 μL

TSG101 Rabbit mAb

31512ES50/60

50 μL/100 μL

 更多外泌体研究及选购指南请参考翌圣官网产品应用专题:外泌体研究整体思路外泌体产品选购指南

 

参考文献

 

Yang D, Zhang W, Zhang H, Zhang F, Chen L, Ma L, Larcher LM, Chen S, Liu N, Zhao Q, Tran PHL, Chen C, Veedu RN, Wang T. Progress, opportunity, and perspective on exosome isolation - efforts for efficient exosome-based theranostics. Theranostics. 2020 Feb 19;10(8):3684-3707. doi: 10.7150/thno.41580. PMID: 32206116; PMCID: PMC7069071.

 

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