GST纯化后为什么电泳或 Western Blot 检测中发现多条带?
GST纯化后为什么电泳或 Western Blot 检测中发现多条带?
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2026-08-24
1.可能是细胞破碎过度,建议减少细胞破碎时间,超声前加入溶菌酶(菌液体积的
0.1 倍 10 mg/mL 溶菌酶,25 mM Tris-HCl,pH 8.0),避免发泡导致蛋白酶变性,过度超声破碎增加宿主内源蛋白与 GST 融合目的蛋白的共纯化。2.可能是Mr 70000 蛋白与目的蛋白一起纯化下来。Mr 70000 蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK 的产物,建议可以在目的蛋白中加入 50 mM Tris-HCl,2 mM ATP,10 mM MgSO4,pH 7.4 在 37℃加热 10min 去除。
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