qPCR可冻干原料是指经过特殊配方优化，可耐受冻干工艺（冷冻干燥，通过低温真空去除水分），冻干后能保持原有生物活性，复溶后可直接用于qPCR反应的一类专用原料。与普通液体qPCR原料相比，其核心要求的差异在于“冻干兼容性”——需去除甘油等影响冻干效果的组分，同时通过添加保护剂、赋形剂，确保冻干过程中酶、引物、探针等核心成分不发生变性、活性不流失，复溶后反应性能与液体原料基本一致。

优质可冻干原料需满足三大核心标准：

1、冻干后形态均一（如冻干球、冻干粉），无明显塌陷、结块；

2、复溶速度快（通常几秒至几分钟内完全溶解），无需剧烈震荡；

3、稳定性优异，常温下可长期保存，复溶后与冻干前无显著差异。

（一）核心酶类（可冻干型）

酶类是qPCR反应的核心动力，可冻干酶类需去除甘油等干扰成分，部分添加专用冻干保护剂，确保冻干后酶活性完整。常见类型如下：

• 热启动Taq酶：包括抗体修饰型和化学修饰型，如翌圣生物的热启动Taq酶（货号13705ES），采用抗体封闭，不含甘油，具备良好的扩增灵敏度和特异性，冻干后稳定性优异，适配多重qPCR场景。

• 逆转录酶：无甘油配方，适用于RT-qPCR体系，如翌圣生物的第三代耐热逆转录酶（无甘油版）（货号11297ES），相比常规的无甘油逆转录酶，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达65℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

• 辅助酶类：无甘油热敏UDG酶（防止PCR产物污染），如翌圣生物的UDG酶，）能高效催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。（货号14001ES），以及无甘油T4 Gene 32 Protein，可以改善长片段及复杂样本扩增效率，以及无甘油热稳定无机焦磷酸酶，负责消化扩增副产物，提升反应性能，这些辅助酶都是构建防污染、高稳定性qPCR体系的重要支撑。

（二）可冻干预混液类

预混液是将酶、dNTPs、缓冲液、冻干保护剂等成分预先混合，可直接添加引物、探针及模板后进行冻干，简化试剂制备流程，是目前应用最广泛的可冻干原料类型。其核心优势的是冻干前后性能一致，支持多重扩增，且适配不同检测场景。

例如翌圣生物开发的 可冻干RT-qPCR预混液（货号11831ES），操作高效便捷，既可作为液体试剂直接检测，亦可冻干后长期储存；试剂稳定性强，冻干后50℃加速25天稳定性依旧良好；冻干形态多样，支持八连管原位冻干、西林瓶冻干、冻干球等多种冻干形式同时支持快速程序，最快40Min可出结果。

图 使用Yeasen的RNA可冻干试剂（Catt#11831ES）分别进行原位冻干和冻干微芯，观察冻干产品的冻干形态：冻干后冻干形态良好，原位冻干表面无塌陷，管内无空隙；冻干球形态饱满圆滑，大小均一。

图 使用Yeasen的RNA可冻干试剂（Catt#11831ES）冻干成冻干微芯后，在不同条件下（正常保存为T0时刻，50℃加速14天及25天）进行处理，同时扩增10⁵ 、10⁴、10³ copies/mL 的新冠假病毒模板，结果显示：冻干微芯热加速前后Ct值、荧光值、球形等均无显著变化，冻干产品稳定性良好。

图 将Yeasen 11831ES冻成冻干微芯，和A公司同类产品，同时检测IVA（1000 copies/mL） 、IVB（1000 copies/mL）、2019-nCoV（500 copies/mL） 及内参模板（模板投入量5uL），结果显示：11831ES冻干微芯与A公司同类产品均能进行4重检测，且检测Ct值及荧光值无差别，11831ES冻干微芯检测灵敏度可达5 copies/T 甚至更高。

（三）辅助试剂类（冻干适配型）

此类试剂为冻干反应提供保障，主要包括冻干保护剂、赋形剂等。保护剂（如糖类、聚合物）可在冻干过程中形成保护膜，防止酶蛋白变性，例如翌圣生物开发的冻干保护剂（货号13743ES），主要成分有海藻糖、PEG、甘露醇等，主要用于辅助液体分子诊断试剂冷冻干燥成型，并且适配多种可冻干试剂，还能提供参考冻干工艺和定制优化服务。

图 辅助液体版本可冻干RT-qPCR试剂，冻干后不影响其性能，且冻干粉热加速稳定。

随着冻干技术的成熟，可冻干原料已广泛应用于分子诊断、生命科学研究、畜牧兽医检测等多个领域，尤其在POCT诊断和大规模筛查中发挥核心作用：

• 临床分子诊断：包括呼吸道病毒、HPV、HBV、肿瘤相关基因等检测，如可冻干RT-qPCR原料用于新冠病毒、流感病毒的快速检测，冻干预混液用于HPV分型检测，无需冷链运输，可快速部署到基层医疗机构、社区检测点，提升检测效率。

• 畜牧兽医检测：用于非洲猪瘟、布鲁氏菌、禽流感等畜禽疫病检测，可常温运输至养殖场、基层兽医站，实现现场快速筛查，助力疫病防控，减少冷链运输对检测时效性的影响，如全式金的可冻干原料已成功应用于非洲猪瘟样本检测。

• 生命科学研究：适用于基因表达分析、基因突变检测、SNP检测等场景，冻干原料可长期保存，便于实验室批量储备和跨实验室合作，避免因试剂运输、保存不当导致的实验误差，适配ARMS-qPCR、数字PCR等多种实验方法。

• 海外出口与应急检测：海外市场对试剂常温储运需求迫切，可冻干原料无需冷链，降低出口运输成本，提升产品竞争力；在突发公共卫生事件中，可快速批量运输至疫情现场，实现快速检测部署，满足应急防控需求。

综上，qPCR可冻干原料凭借常温储运、长期稳定、操作便捷等核心优势，逐步替代传统液体原料，成为分子诊断行业发展的重要方向。

翌圣生物部分冻干产品