前言

自体CAR-T、通用型细胞疗法等CGT（细胞与基因治疗）产品，为肿瘤、罕见遗传病患者带来了新的治疗希望。但在实际生产中，行业长期面临一个现实困境：患者已准备就绪、细胞制剂已制备完成，却仍需等待支原体检测结果—传统培养法需要整整28天。

对于有效期仅数天甚至数小时的CGT产品而言，这一时间差确实给临床给药节奏和企业放行管理带来了实际压力。随着全球药监机构逐步认可核酸扩增技术（NAT）作为支原体检测的法定方法，以qPCR探针法为核心的快速检测方案，正在为CGT企业实现更高效的放行管理提供可行的技术路径。

一、28天培养法：与CGT产品特性的现实矛盾

1.1  支原体：细胞培养中需重点防范的污染源

支原体是生物制药、细胞培养领域公认的 “隐形杀手”，特殊无细胞壁结构使其可穿透常规无菌滤膜，且对多数广谱抗生素天然耐受，污染隐蔽性极强：

1) 污染后培养液无浑浊、显微镜下无明显异常，肉眼无法识别；

2) 持续干扰细胞正常代谢、破坏基因转染效率，诱发细胞染色体畸变；

3) 一旦流入临床回输环节，可能会引发患者免疫不良反应，存在临床安全风险。

基于上述安全风险，全球各国药典均将支原体检测列为生物制品强制放行检测项。我国 2020 版《中国药典》明确规定，主细胞库（MCB）、工作细胞库（WCB）、生产终末细胞（EOPC）全流程必须开展支原体检查，覆盖细胞种子、培养基、中间培养物、终末制剂全生产节点。

生物制品全流程支原体检测取样节点示意图：

图1：生物制品生产过程中支原体检测取样点（图片来自网络）

1.2 传统培养法的时间成本与CGT产品特性的冲突

传统培养法凭借高灵敏度和广谱检出能力，长期被视作支原体检测的“金标准”。但其28天的完整检测周期，在实际应用中与CGT产品的特性存在客观矛盾：

①不同产品类型的适配差异

单抗、疫苗等生物药效期长达数月，28天的检测周期对放行节奏影响有限；而CAR-T等自体细胞治疗产品，从患者采血到回输的生产周期通常约为3~7天，检测时间远超产品制备周期，给放行管理带来额外难度。

表 1：不同生物制品支原体检测周期适配对比

②企业在放行策略上面临两难

若等待完整检测结果再放行，可能影响细胞制剂的时效性；若提前采用条件放行，企业需承担相应的合规风险。这一矛盾在IND申报和商业化生产中尤为突出。

③拉长项目研发周期，抬高临床运营成本

细胞库检定、工艺稳定性验证、临床批次放行均需重复支原体检测，28 天周期会大幅延缓研发管线推进速度，增加细胞冻存、仓储、人员运维成本。

二、NAT核酸扩增技术：缩短检测时间的技术路径

图2：qPCR核酸扩增过程

实时荧光定量 PCR（qPCR）作为成熟的 NAT 核酸扩增技术，核心原理为特异性识别支原体保守 DNA 序列，无需活菌增殖培养，数小时即可出具精准检测结果。

2.1 核心性能优势，兼顾速度、灵敏度与标准化

①检测周期大幅压缩：完整检测流程仅需 3~5 小时，对比 28 天培养法，检测效率大幅提升，适配 CGT 即时放行需求；

②灵敏度对标药典标准：方法检出限可达≤10 CFU/mL，性能可对标传统培养法，满足全球药典替代验证要求；

③操作标准化程度高：流程固定、结果量化，人为误差低，适合企业规模化批量样品检测，适配 GMP 洁净实验室常态化使用。

2.2 全球药监全面认可，NAT 获得合法合规通行证

目前NAT方法已获全球主流药典收录，企业通过方法验证后可依法使用：

表 2：全球主流药典 NAT 支原体检测法规汇总

2.3 NAT 方法验证三大核心指标

依据 EP、日本药典规范，NAT 试剂盒落地使用必须完成三项核心参数验证，也是 IND 申报核查重点：

专属性：精准识别目标支原体，无近缘菌种交叉反应（梭菌、乳杆菌、链球菌等），不受 CHO、HEK293、Vero 等常用工程细胞基因组干扰；

检测限 LOD：≤10 CFU/mL，具备替代传统28天培养法的合规基础；≤100 CFU/mL 可替代指示细胞培养法，是 CGT 企业选型核心指标；

耐用性：试剂浓度、仪器型号、孵育温度小幅波动时，检测结果稳定可靠，适配实验室日常多变操作环境。

三、翌圣生物MycAway® 2G系列：满足CGT快速放行需求的合规工具

针对CGT行业样本量有限、时效要求高、仪器平台多样、合规要求严格等特点，翌圣生物推出MycAway® 2G支原体qPCR检测试剂盒（探针法）（货号40619ES），同时配套支原体检测、清除、环境防控全系列产品，已服务于多个国内IND申报及在研项目。

3.1  MycAway® 2G 支原体检测产品核心特点

(1) 覆盖范围广，降低漏检风险

采用优化设计的TaqMan探针体系，可检测183种支原体DNA序列，覆盖EP、USP、JP、ChP四大药典要求的全部支原体菌株类型。

(2) 样本需求量低，适配珍贵样品

所需待测样本模板量低，对于样本获取难度大的CGT自体细胞制剂而言，可在同等样本量下完成更多次数的检测验证。

(3) 仪器兼容性强，降低落地门槛

适配ABI 7500、ABI QuantStudio™5、Bio-Rad CFX96、罗氏LightCycler®480等主流qPCR设备，实验室无需额外配置专用仪器。

3.2 符合药典的产品开发

该试剂盒在设计开发过程中，严格参照EP 2.6.7（12.2版）、JP G3及USP 63的药典要求，围绕专属性、检测限、耐用性等核心参数进行了系统化的方法学验证。试剂盒同时引入内部质控（IC）和UNG防污染系统，有效排除假阴性结果并降低交叉污染风险，产品生产符合ISO 13485质量体系标准。

四、行业发展趋势：NAT 快速检测成为 CGT 产业化标配

随着 CGT 产业商业化进程加速，传统28天的支原体培养法在时效性上与产品特性之间的矛盾日益显现。对于布局细胞治疗管线的生物医药企业，选择经全球药典验证、样本适配性强、配套合规文件完善的成熟 qPCR 试剂盒，是解决支原体放行时效性问题、推动管线高效推进的重要工具之一。翌圣 MycAway® 2G 系列依托全方位性能升级与全链条污染管控方案，为 CGT 企业提供 “快、准、合规” 一体化支原体检测解决方案，助力国内细胞与基因治疗产业高质量发展。

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