MycAway®支原体qPCR检测试剂盒(探针法)(2G) Real-time qPCR Detection Kit（40619ES）

翌圣生物MycAway®支原体qPCR检测试剂盒（探针法）(2G)是基于NAT (nucleic acid amplification techniques)的一种快速定性检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治疗用细胞中潜在支原体污染的产品。

该试剂盒基于定量PCR技术，采用多重PCR的方法，使用2种荧光探针，FAM和CY5，分别检测目标序列和内参。相较40618ES货号的支原体qPCR检测试剂盒，该2G版本可覆盖多达183种支原体DNA序列，所需待测样本的模板量也减少了一半，还可兼容更多品牌的qPCR仪器。

同时，MycAway®支原体qPCR检测试剂盒（探针法）(2G)也严格按照EP 2.6.7进行专属性、检测限、耐用性的全面验证，检测限满足药典≤10 CFU/mL的要求，实际检测限0.1-2CFU/mL。同时覆盖USP、JP、WHO、ChP等中要求验证的支原体菌株类型，试剂盒性能符合中外法规要求，助力生物医药客户的药物研发项目临床实验申请等的顺利受理。

产品资质

符合法规：按照EP2.6.7、JP G3和USP 63药典要求验证，符合国际权威机构的标准；

配合审计：产品生产符合ISO13485质量体系标准，有完善的审计文件；

保障品质：试剂盒所需酶原料全自产，且已产业化，供货稳定；

技术经验积累：TaqMan法有技术沉淀，Kit灵敏度可达0.1-2CFU/mL；

专注产品性能：Taq酶抗体库，双封闭抗体提高了Kit特异性、灵敏度、稳定性。

检测种类多：优化的TaqMan探针可检测多达183种支原体；

操作简便：样本制备和检测总时长<3h，无需培养法的28天等待；

灵敏度高：检测限达到可以替代直接培养法的10CFU/mL，甚至低至1CFU/mL及以下；

专属性强：验证了多个亲缘关系物种、常用细胞系和样本基质等，均无交叉反应；

安全性高：试剂盒内阳性对照(PC)无感染性，完全消除污染风险；

防干扰强：引入内部质控(IC)，可排除样本干扰、反应配制异常等因素，有效避免假阴性。

1. 检测限

采用商品化支原体灵敏度标准品开展检测限验证，覆盖 EP 2.6.7 与 JP G3-14-170 要求的共 10 种支原体。对药典要求的 10 CFU/mL菌株平行检测 24 次，结果 24/24 全部阳性（药典要求 24 次中至少 23 次阳性，即检出率 ≥95%）。实际检出限 0.1–2 CFU/mL，较药典 10 CFU/mL 红线再低 5–100 倍。

                                                                                                       表1. 验证菌株及检测限信息

例：Mycoplasma arginini 精氨酸支原体 10CFU/mL、1CFU/mL浓度样品，分三次检测，每次8重复，总检测结果满足 24 次中≥23 个检测结果为阳性。下述展示了三次中的一次实验数据：

                                                                                         表2. 精氨酸支原体的检测结果（10CFU/mL/1CFU/mL）

样品	FAM Ct	CY5 Ct	结果判读
Mycoplasma arginini 10 CFU/ml	34.33	26.61	阳性
	34.22	26.58	阳性
	34.05	26.57	阳性
	33.90	26.51	阳性
	34.41	26.91	阳性
	34.11	26.83	阳性
	34.43	26.95	阳性
	34.04	26.80	阳性
NCS	/	26.48	合格
NCS	/	26.45	合格
NTC	/	26.57	合格
NTC	/	26.72	合格
支原体靶标通道		IC通道
样品	FAM Ct	CY5 Ct	结果判读
Mycoplasma arginini 1 CFU/ml	37.49	27.49	阳性
	36.33	27.53	阳性
	36.36	27.45	阳性
	36.75	27.42	阳性
	37.36	27.47	阳性
	39.61	27.67	阳性
	36.34	27.59	阳性
	36.99	27.41	阳性
NCS	/	27.62	合格
NCS	/	27.51	合格
NTC	/	27.66	合格
NTC	/	27.66	合格
NTC	/	26.71	合格
支原体靶标通道		IC通道

2. 专属性

交叉反应：选取了14种非柔膜菌纲的菌株、6种生物医药常用的工程细胞的DNA，采用本支原体qPCR试剂盒进行支原体检测。检测结果得出：支原体目的通道均无起峰，内参IC正常扩增。

                                                                                                    表3. 共20种菌株和工程细胞的支原体检测结果

3. 支原体qPCR试剂盒产品性能验证总结

                                              表4. 支原体qPCR检测试剂盒性能验证内容和结论

-25~-15℃保存，有效期2年。

*收到货后，请检查各组分是否齐全，如不立即开封各组分做实验，需立即放入-25~-15℃中保存。注意40619-B需要避光保存。