Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。 因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein, AM细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。

由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发，仅可观察到死细胞。

本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系，单次就200 µL细胞悬液进行染色，分别可以做500次（CAS: 40747ES76）和1000次（CAS: 40747ES80）检测。

冰袋运输；其中A组分和B组分需-20℃避光干燥保存，C组分-20℃保存，经常使用可放在4℃保存。一年有效。

Q：40747ES76 Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒 Calcein-AM/PI Double Stain Kit 共聚焦皿可以不消化吗？

A：可以的，不用消化，直接染色观察。

Q：40747ES76 Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒，做流式实验时跑什么panel？

A：钙黄绿素的颜色选择 FL1 通道，PI 的颜色选择FL3 通道。

Q：Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒，这个染料不可以直接染贴壁细胞么？ 直接在六孔板上看荧光，这个可以吗？

A：不建议，对光有影响，效果不好，可以使用玻璃皿。

Q：一个细胞两种颜色均被染上，怎么判断结果呢？

A：可判定为死细胞。原因：由于死细胞缺乏酯酶或酯酶活性很低，Calcein AM进入细胞后含有酯酶的活细胞可以产生Calcein，而死细胞不能或很少能产生Calcein，因此仅活细胞会被染色为强绿色荧光，死细胞不能被染色或者染色非常弱。PI由于不能穿透活细胞的细胞膜，而只能染色细胞膜完整性被破坏的死细胞。所以被染成红色的活黄色的（绿色和红色均被染上）可以判定为死细胞，活细胞只发绿色荧光。

建议：实验前进行摸索Calcein AM和PI的染色浓度，选择合适的染色浓度