Hieff® LongSeq Plasmid Fragmentation and Ligation Module（三代全长质粒酶切建库模块）
产品介绍
Hieff® LongSeq Plasmid Fragmentation and Ligation Module是针对三代Nanopore测序平台开发的质粒酶切建库模块，搭配13304ES即可完成质粒建库。该试剂盒适用于质粒建库，同时酶切末端修复加A尾后无需纯化，可直接进行Barcode连接，实验流程更便捷。
产品特色
l 兼容50 ng-1 µg。
l 文库制备时间约2 hour。
l 严格的批次性能与稳定性质控。
应用案例
全长质粒测序优势：
| 对比维度 | 一代测序（Sanger测序） | 二代测序（NGS） | 三代测序（ONT/Pacbio） |
| 核心技术 | 链终止法，通过毛细管电泳读取序列 | 大规模并行测序（如Illumina），先将DNA打断为短片段，拼接后获得完整序列 | 单分子实时测序（如纳米孔测序），直接读取完整DNA分子，无需打断 |
| 读长 | 约1000 bp | 200-500 bp，依赖复杂的片段拼接 | 超长读长，可达几十kb甚至Mb级别，可直接覆盖质粒全长 |
| 优势 | 准确度极高（99.999%），是传统的“金标准” | 高通量、成本低，可一次性对大量质粒进行测序 | 无需引物设计，可“盲测”未知质粒。完美攻克复杂结构，如高GC含量、重复序列、发卡结构（如AAV的ITR区）。可直接检测DNA甲基化修饰 |
| 局限性 | 通量低，测通一个质粒需设计多对引物进行“引物步移”，周期长、成本高。无法处理复杂结构，在重复序列处易“卡壳” | 读长短，对于重复序列等复杂区域的组装困难，可能丢失信息。依赖PCR扩增，可能引入扩增偏倚 | 原始读长错误率较高（~Q20），但可通过测序深度校正，矫正后准确率可达99.9%（Q30）以上。 |
| 最佳应用场景 | 局部区域验证，如单克隆位点、插入片段两端的序列确认 | 大规模、常规质粒的批量验证，如质粒库的质控 | 复杂质粒的完整性验证（含ITR、重复序列等）、基因治疗原料质控、未知质粒的从头测序 |
数据展示1：翌圣试剂在ONT平台质粒测序结果展示
实验方案：使用翌圣全长质粒建库试剂盒13305ES和马达蛋白接头连接模块13304加上针对ONT平台的barcode（13317ES/13318ES）对不同类型的质粒进行全长建库后，使用ONT测序仪进行测序。
表：不同质粒ONT平台全长测序结果展示
图：不同质粒全长测序后片段长度结果展示
图：不同质粒全长测序序列展示
数据展示2：翌圣试剂在ONT平台和序风（Cyclone）平台质粒测序比对结果展示
实验方案：使用翌圣全长质粒建库试剂盒13305ES和马达蛋白接头连接模块13304进行全长质粒建库后，在ONT和序风（cyclone）平台进行测序。
图：相同质粒在ONT和序风（cyclone）平台测序结果比较
数据展示3：AAV质粒的全长测序结果展示
表：AAV质粒全长测序的竞品对比展示
存储条件
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COA
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