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DRAQ5是一种新型细胞渗透性远红色荧光DNA探针,其荧光可反映细胞DNA含量。该探针可在接近647 nm的激发波长(Ex)下被激发,产生的荧光光谱覆盖从665 nm直至780 nm以外的波长范围。DRAQ5能够与FITC和RPE标记的抗体联合使用,并且在共检测时无需进行荧光补偿。
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一. 活细胞成像:DRAQ5是一种膜透性的DNA染料,具有远红外亲脂性,可用于活细胞或固定后死细胞的细胞核染色,其激发和反射波段范围宽泛,常和其他染料联合使用进行多通路检测。
二. 细胞周期核酸含量测定:DRAQ5能特异性结合DNA而不结合RNA,可用于细胞周期中DNA含量的分析,无需RNase和破膜处理,操作简便快捷。
染色方法:
1. 用不含有叠氮化钠的PBS缓冲液或实验体系的细胞培养基重悬细胞,细胞密度≤4×10⁵个/mL(如2~4×10⁵个/mL密度)。
2. 稀释DRAQ5荧光染色液,每mL培养基中加入4 µL 5 mM 染料原液(710902ES),此时染料终浓度为20 µM,DRAQ5染色液可以直接添加到贴壁细胞或组织切片表面,也可直接添加到新鲜培养基中。
3. 轻柔混合均匀,室温孵育5~30 min,若37℃孵育可将时间缩短至1~3 min。孵育完成后无需清洗步骤,直接观察即可。
【注】不同细胞染色工作液浓度和染色时间不同,在实验前请根据实际实验情况进行预实验,确定适合自身实验体系的最佳染色浓度和染色时间。
【注】细胞核染色一般在2.5-5 µM即可检测。当实验需要连续监测,如EGFP标记蛋白的易位实验,DRAQ5染色液需要在加入激动剂/拮抗剂前0.5-3 h内加入,浓度为1 μM。
【注】实验注意适当的避光操作。
荧光检测:
1. 流式细胞术:活细胞成像分析,在488 nm处激发这种染料时,可使用685 LP二向分色镜和710/50通道进行检测;在633 nm处激发时,可使用660/20通道进行检测。细胞周期/DNA分析,建议使用波长较长的滤光片,如735 LP二向分色镜和780/60通道来优化G1和G2/M峰的CV值。
2. 成像显微术:建议使用633 nm或647 nm光源进行激发检测。
2~8℃避光保存,有效期3年。
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