推荐应用
BODIPY 665/676是一种亲脂性自由基敏感荧光探针,适用于研究自由基引发的脂质自氧化过程,其激发/发射波长为665/676 nm。
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使用方法(仅供参考,具体请根据实际实验情况进行调整):
1. BODIPY 665/676储存液配制
向1 mg的BODIPY 665/676中加入223 μL的新鲜DMSO,充分混匀,无明显不溶物,配置成10 mM的储存液(母液)。
【注】:建议将配置好的储存液按每次需求量,分装后于-80℃(更佳)或-20℃保存,避光干燥,避免反复冻融。
2. BODIPY 665/676工作液配制
可以用生理缓冲液(如PBS等),或者预热好的无血清细胞培养基,稀释上述10 mM的储存液(母液),配制成终浓度为1-10 μM的BODIPY 665/676工作液。
【注】:工作液现配现用,不易久置。工作液的浓度供参考,具体需要根据实际的实验情况进行适当的调整。
3. 细胞孵育
37℃,将BODIPY 665/676工作液和待测细胞进行孵育,30-60 min,然后使用荧光分光光度计进行样品的荧光检测。
【注】:还原态激发光和发射波长为665 nm / 676 nm(可用APC通道检测),如果样品被氧化,荧光会发生蓝移,此时最大激发和发射波长会变成580 nm / 605 nm。如果仪器配备561 nm的激光器,可以用561 nm激光器下的PE-CF594通道检测。若没有,不建议用488 nm下的PE-CF594通道检测。成像检测可以设置相应的激发光和检测波长。
【注】:含不饱和脂肪酸的样品建议在氮气保护下进行实验处理。
粉末-25~-15℃避光保存,有效期3年。
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