Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM的类似物，是一种高亲和力Ca²⁺荧光探针，其AM酯修饰使其能被细胞摄取，并在胞内被酯酶水解活化，从而滞留并发出荧光以指示Ca²⁺水平，具有高灵敏度和低细胞毒性。Mag-Fluo-4 AM对Mg²⁺ (镁离子)和Ca²⁺ (钙离子)的解离常数(Kd)值分别是4.7 mM和22 µM，可作为细胞内Ca²⁺ (钙离子)和Mg²⁺ (镁离子)指示剂，适用于监测高浓度及快速变化的Ca²⁺信号以及细胞内Mg²⁺稳态的变化（Ex/Em：495/525 nm）。

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使用指南（仅供参考，具体可根据实际实验情况进行适当的摸索和调整）：

1. Mag-Fluo-4 AM配制：

1.1 储存液配置：

用完全无水DMSO溶解Mag-Fluo-4 AM，配制成2 mM~10 mM的储存液。

【注】Mag-Fluo-4 AM储存液建议按照每次使用量进行分装，-20℃或-80℃低温避光保存，避免反复冻融。

【注】DMSO需确保是完全无水，最好是新开封未吸湿的DMSO，否则水会影响产品的稳定性。

1.2 工作液配置：

用预热好的HEPES缓冲液（或其他相关缓冲体系，如Hanks、HBSS等）稀释已放置室温的储存液，配制成1~20 μM的Mag-Fluo-4 AM工作液，工作液现配现用，立刻使用，不宜久置。

【注】请根据实验的具体情况调整Mag-Fluo-4 AM工作液浓度，多数细胞作用的终浓度在5 μM上下。

【注】Pluronic F-127可提高Mag-Fluo-4 AM的水溶性，可根据需要看是否加入，不是必须。

【注】若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入阴离子转运抑制剂（如1-2 mM丙磺舒，孔内终浓度为0.5-1 mM），可减少探针泄漏。

2. 染色操作步骤：

2.1 向过夜细胞培养的细胞板中加入1× Mag-Fluo-4 AM工作液。

【注】若待测化合物与血清有相互作用，加入前需更换为新鲜的不含血清的缓冲液（如HHBS缓冲液）。

2.2 37°C细胞培养箱中，孵育30-60分钟。

【注】某些细胞系可延长孵育时间至1小时以上以提高信号强度。具体时间需根据实际情况进行调整。

2.3 用HHBS或1 mM丙磺舒的缓冲液替换工作液。

2.4 加入刺激剂后，使用配备FITC滤光片的荧光显微镜检测荧光信号。

【注】荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation），检测参数：Ex/Em=490/525 nm，截止波长515 nm。

-25~-15℃避光干燥密封保存，有效期2年。