推荐应用
TMRE是一种特定的线粒体染料,激发和发射波长分别为 550 nm 和 575 nm。
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(以下方案仅供参考,具体请参考相关文献并根据自己实验进行调整和摸索)
1. TMRE的配置
1.1 TMRE储备液的制备。储备溶液应在二甲基亚砜(DMSO,浓度5mM)中制备。然后应通过等分并重新冷冻至至少-20°C的温度将储备溶液施加到未使用的溶液中。 重要的是要避免重复的冻融循环。该溶液可保存长达3~6个月。
1.2 TMRE工作液的制备
储备液应用无血清细胞培养基或PBS稀释,以获得1-20 μM的工作溶液。
请注意,工作溶液的最终浓度取决于实验系统。因此,建议优化最终浓缩条件。
2. 细胞染色
2.1 细胞悬液(6孔板)
2.1.1 在4°C下以1000 g离心3-5分钟,然后丢弃上层。
2.1.2 用PBS洗涤两次,每次5分钟。
2.1.2. 请加入1 mL工作溶液,室温孵育5-30分钟。
2.1.3. 在4°C下以400 g离心3-4分钟。 请立即处理该物品。
2.1.4. 建议每次用 PBS 清洗物品两次,每次5分钟。
2.1.5. 细胞应重悬于无血清细胞培养基或磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。然后应使用荧光显微镜或流式细胞术观察它们。
2.2. 贴壁细胞
2.2.1. 贴壁细胞的培养应在无菌盖玻片上进行。
2.2.2. 然后应从培养基中取出盖玻片并吸出多余的培养基。
2.2.3. 接下来,加入100 μL工作溶液,轻轻摇晃以确保细胞完全覆盖,然后在室温下孵育30-60分钟。
2.2.4. 请确保分两次彻底清洗培养基,每次持续5分钟。该样品的观察应使用荧光显微镜或流式细胞仪进行。
请注意,如果要使用流式细胞术,则必须在染色前重悬细胞。
2~8℃避光保存,有效期3年。
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