EGR1-Luc萤光素酶报告基因(报告基因质粒)(EGR1 luciferase reporter plasmid)是翌圣生物自主研发的用于检测EGR1转录活性水平为目的的报告基因。早期生长反应基因1(early growth response gene 1 , EGR1) 为早期生长反应基因家族重要成员,其蛋白产物是一个59KD的锌指样转录因子。EGR1的目的基因是分化和有丝分裂所必须的。
ERG1报告基因主要检测细胞中ERG1的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pEGR1-Luc是翌圣生物改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个EGR1结合位点,可以高灵敏度地检测EGR1的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小,使得EGR1报告基因质粒更易于转染。
冰袋运输。-20℃保存。保质期1年。
Q:报告基因质粒的全序列能否提供?结合位点序列两端的酶切位点是什么?
A:全序列和酶切位点序列均是保密的,在已购买的说明书版本上会提供转录因子的结合位点序列和质粒测序引物序列。
Q:LUC 系列的报告基因质粒骨架是什么?报告质粒的启动子是什么?
A:骨架是 PGL-6-TA。LUC 的启动子是PTA,抗性基因的启动子是SV40。
Q:怎么保证报告基因系列质粒的有效性的?有没有做功能性的实验验证?
A:保证全序列正确。未进行功能性试验验证,可以参考相关文献。
Q:报告基因质粒导入细胞后能稳定遗传吗?
A:不建议做稳转,常用于瞬转。
Q:1μg 报告基因质粒是固体还是液体形式?浓度是多少?报告基因质粒 1μg 包装可以用多少次?
A:液体,浓度在 100ng/μl 左右。不建议直接用,可以转化到感受态细胞如 DH5α中摇菌抽提质粒进行扩大量。
Q:报告基因质粒是针对什么物种的?
A:仅用于哺乳动物,如人,小鼠等。
Q:报告基因质粒转染有什么特别要注意的?
A:没有,和普通质粒转染一样。转染方法参考所用转染试剂。
Q:阴性对照和阳性对照是什么?
A:阴性对照是 Luciferase Reporter Plasmid negative control (荧光素酶报告基因质粒阴性对照),11555ES03。阳性对照需客户自己参考相关文献。
[1] Huang Q, Niu Z, Han J, et al. HTLV-1 Tax upregulates early growth response protein 1 through nuclear factor-κB signaling. Oncotarget. 2017;8(31):51123-51133. Published 2017 May 8. doi:10.18632/oncotarget.17699(IF:5.168)