Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(磁珠法)可以快速地将DNA样品中的未甲基化胞嘧啶转化成尿嘧啶而甲基化胞嘧啶维持不变,双链DNA经过高温亚硫酸氢盐处理后,双链DNA解链变成单链,在HSO3-作用下,导致胞嘧啶残基发生脱氨基反应并将它们转化为尿嘧啶,甲基化修饰的残基保持不变。进而在后续PCR扩增过程中,尿嘧啶会被胸腺嘧啶(T)取代。DNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。
- 样本适用范围广:可满足100 pg-2 μg样品的转化
- 转化效率高:转化率≥99.5%
- 转化速度快:5min内可完成转化
- 操作简便:可搭配自动化设备(AP-16S/AP-48S/AP-96N)
图1:投入不用量的293gDNA,293gDNA参入0.5% λ DNA,使用12227(磁珠法)与竞品1转化试剂盒进行头对头对比,同时采用双链甲基化DNA建库(12214ES),结果所示:12227(磁珠法)对不同投入量的DNA中 λ DNA C的转化率≥99.5%,转化时间适当延长,能进一步提高转化效率。
图2:10 ng cf DNA和50 ng FFPE DNA,cf DNA和FFPE DNA都参入0.5% λ DNA,使用12227(磁珠法)与竞品1转化试剂盒进行头对头对比,同时采用双链甲基化DNA建库(12214ES),结果所示:12227(磁珠法)对不同样本中 λ DNA C的转化率≥99.5%,转化时间适当延长,能进一步提高转化效率。
图3:投入不同量的293 DNA,使用12225和12227与竞品1转化试剂盒进行头对头对比,转化后采用Qubit ssDNA定量,计算回收率,结果所示:12225的样本回收率能稳定达到60%以上,并且当样本量大于200 ng,回收率能超过70%,磁珠法转化试剂在高投入量下,回收率略低于柱式法,1 μg以内,磁珠法的回收率能达到60%。
12227-A转化液室温避光保存,其他组分室温保存,有效期1年。
【注】:12227-A存放温度尽量不要超过25℃,温度太高会导致晶体析出。