EMSA PAGE Gel Preparation Kit EMSA PAGE凝胶配制试剂盒

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产品说明书

FAQ

COA

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产品简介

 

凝胶迁移实验(也称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验) (Electrophoretic mobility shift assay, EMSA),也称Gel Shift,是一种用于研究蛋白与核酸相互作用的高灵敏实验技术。最初主要用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用于蛋白与DNA、蛋白与RNA相互作用研究。EMSA技术基于进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白质与DNA或RNA复合物的迁移速度比游离线性DNA或RNA片段慢,从而导致DNA或RNA迁移位置在与蛋白质结合时滞后。

该试剂盒包含配置EMSA PAGE凝胶的所有试剂,客户可搭配蛋白电泳胶制胶组合(Cat# 80813ES)使用。本试剂盒约可配制30-50块常规大小的EMSA PAGE凝胶,具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。

 

产品信息

 

货号

21102ES50

规格

1 kit (30~50 gels)

 

产品组分

 

组分编号

组分名称

规格

保存方式

21102-A

40%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(39:1)

50 mL

4ºC避光

21102-B

TBE Buffer (10×)

25 mL

室温

21102-C

50% Glycerol

25 mL

室温

21102-D

APS 过硫酸铵

0.8 g

室温

21102-E

TEMED 四甲基二乙胺

0.6 mL

4ºC避光

 

储存条件

 

TBE Buffer (10X)、50% Glycerol和APS室温保存。40% Acr-Bis (39:1)和TEMED Substitute 4ºC避光保存。有效期1年。

 

操作方法

 

1. 准备制备凝胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳凝胶的模具,如我司的蛋白电泳胶制胶组合(Cat# 80813ES。最好选择可以灌制较薄凝胶的模具(如0.75 mm厚度),以便于干胶、转膜等后续操作。为获到更好的条带分离效果,可以选择可灌制较大EMSA凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净,需特别注意不能有SDS残留。

2. 配置10% APS,如称取0.1 g APS,用蒸馏水溶解,并定容至1 mL,即为10% APS,推荐分装后使用,避免反复冻融。

3. 配制一块常用EMSA PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需凝胶溶液体积:0.75 mm厚度凝胶约5 mL;1 mm厚度凝胶约7 mL;1.5 mm厚度凝胶约10 mL。均含约0.5 mL的余量。

4. 制胶

根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,并根据下表配制凝胶:

凝胶浓度

凝胶体积(mL)

 

所需各组分体积(单位:mL)

TBE Buffer

 (10×)

蒸馏水

40% Acr-Bis (39:1)

50% Glycerol

10%APS

TEMED

4%胶

10

0.5

8

1.0

0.5

0.07

0.005

20

1.0

16

2.0

1.0

0.14

0.01

30

1.5

24

3.0

1.5

0.21

0.015

40

2.0

32

4.0

2.0

0.28

0.02

50

2.5

40

5.0

2.5

0.35

0.025

4.5%胶

10

0.5

7.9

1.1

0.5

0.07

0.005

20

1.0

15.7

2.3

1.0

0.14

0.01

30

1.5

23.6

3.4

1.5

0.21

0.015

40

2.0

31.5

4.5

2.0

0.28

0.02

50

2.5

39.4

5.6

2.5

0.35

0.025

5%胶

10

0.5

7.7

1.3

0.5

0.07

0.005

20

1.0

15.5

2.5

1.0

0.14

0.01

30

1.5

23.2

3.8

1.5

0.21

0.015

40

2.0

31

5.0

2.0

0.28

0.02

50

2.5

38.7

6.3

2.5

0.35

0.025

5.5%

10

0.5

7.6

1.4

0.5

0.07

0.005

20

1.0

15.2

2.8

1.0

0.14

0.01

30

1.5

22.9

4.1

1.5

0.21

0.015

40

2.0

30.5

5.5

2.0

0.28

0.02

50

2.5

38.1

6.9

2.5

0.35

0.025

6%

10

0.5

7.5

1.5

0.5

0.07

0.005

20

1.0

15

3.0

1.0

0.14

0.01

30

1.5

22.5

4.5

1.5

0.21

0.015

40

2.0

30

6.0

2.0

0.28

0.02

50

2.5

37.5

7.5

2.5

0.35

0.025

备注:通常10-30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关,上表中10% APS和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25ºC时的推荐用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20ºC时建议使用正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议使用正常推荐用量的2倍。

 

注意事项

 

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  2. 本产品仅作科研用途。

 

 

Ver.CN20241012

 

400-6111-883