产品简介
凝胶迁移实验(也称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验) (Electrophoretic mobility shift assay, EMSA),也称Gel Shift,是一种用于研究蛋白与核酸相互作用的高灵敏实验技术。最初主要用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用于蛋白与DNA、蛋白与RNA相互作用研究。EMSA技术基于进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白质与DNA或RNA复合物的迁移速度比游离线性DNA或RNA片段慢,从而导致DNA或RNA迁移位置在与蛋白质结合时滞后。
该试剂盒包含配置EMSA PAGE凝胶的所有试剂,客户可搭配蛋白电泳胶制胶组合(Cat# 80813ES)使用。本试剂盒约可配制30-50块常规大小的EMSA PAGE凝胶,具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。
产品信息
货号 |
21102ES50 |
规格 |
1 kit (30~50 gels) |
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
规格 |
保存方式 |
21102-A |
40%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(39:1) |
50 mL |
4ºC避光 |
21102-B |
TBE Buffer (10×) |
25 mL |
室温 |
21102-C |
50% Glycerol |
25 mL |
室温 |
21102-D |
APS 过硫酸铵 |
0.8 g |
室温 |
21102-E |
TEMED 四甲基二乙胺 |
0.6 mL |
4ºC避光 |
储存条件
TBE Buffer (10X)、50% Glycerol和APS室温保存。40% Acr-Bis (39:1)和TEMED Substitute 4ºC避光保存。有效期1年。
操作方法
1. 准备制备凝胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳凝胶的模具,如我司的蛋白电泳胶制胶组合(Cat# 80813ES)。最好选择可以灌制较薄凝胶的模具(如0.75 mm厚度),以便于干胶、转膜等后续操作。为获到更好的条带分离效果,可以选择可灌制较大EMSA凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净,需特别注意不能有SDS残留。
2. 配置10% APS,如称取0.1 g APS,用蒸馏水溶解,并定容至1 mL,即为10% APS,推荐分装后使用,避免反复冻融。
3. 配制一块常用EMSA PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需凝胶溶液体积:0.75 mm厚度凝胶约5 mL;1 mm厚度凝胶约7 mL;1.5 mm厚度凝胶约10 mL。均含约0.5 mL的余量。
4. 制胶
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,并根据下表配制凝胶:
凝胶浓度 |
凝胶体积(mL) |
|
所需各组分体积(单位:mL) |
||||
TBE Buffer (10×) |
蒸馏水 |
40% Acr-Bis (39:1) |
50% Glycerol |
10%APS |
TEMED |
||
4%胶 |
10 |
0.5 |
8 |
1.0 |
0.5 |
0.07 |
0.005 |
20 |
1.0 |
16 |
2.0 |
1.0 |
0.14 |
0.01 |
|
30 |
1.5 |
24 |
3.0 |
1.5 |
0.21 |
0.015 |
|
40 |
2.0 |
32 |
4.0 |
2.0 |
0.28 |
0.02 |
|
50 |
2.5 |
40 |
5.0 |
2.5 |
0.35 |
0.025 |
|
4.5%胶 |
10 |
0.5 |
7.9 |
1.1 |
0.5 |
0.07 |
0.005 |
20 |
1.0 |
15.7 |
2.3 |
1.0 |
0.14 |
0.01 |
|
30 |
1.5 |
23.6 |
3.4 |
1.5 |
0.21 |
0.015 |
|
40 |
2.0 |
31.5 |
4.5 |
2.0 |
0.28 |
0.02 |
|
50 |
2.5 |
39.4 |
5.6 |
2.5 |
0.35 |
0.025 |
|
5%胶 |
10 |
0.5 |
7.7 |
1.3 |
0.5 |
0.07 |
0.005 |
20 |
1.0 |
15.5 |
2.5 |
1.0 |
0.14 |
0.01 |
|
30 |
1.5 |
23.2 |
3.8 |
1.5 |
0.21 |
0.015 |
|
40 |
2.0 |
31 |
5.0 |
2.0 |
0.28 |
0.02 |
|
50 |
2.5 |
38.7 |
6.3 |
2.5 |
0.35 |
0.025 |
|
5.5% |
10 |
0.5 |
7.6 |
1.4 |
0.5 |
0.07 |
0.005 |
20 |
1.0 |
15.2 |
2.8 |
1.0 |
0.14 |
0.01 |
|
30 |
1.5 |
22.9 |
4.1 |
1.5 |
0.21 |
0.015 |
|
40 |
2.0 |
30.5 |
5.5 |
2.0 |
0.28 |
0.02 |
|
50 |
2.5 |
38.1 |
6.9 |
2.5 |
0.35 |
0.025 |
|
6% |
10 |
0.5 |
7.5 |
1.5 |
0.5 |
0.07 |
0.005 |
20 |
1.0 |
15 |
3.0 |
1.0 |
0.14 |
0.01 |
|
30 |
1.5 |
22.5 |
4.5 |
1.5 |
0.21 |
0.015 |
|
40 |
2.0 |
30 |
6.0 |
2.0 |
0.28 |
0.02 |
|
50 |
2.5 |
37.5 |
7.5 |
2.5 |
0.35 |
0.025 |
备注:通常10-30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关,上表中10% APS和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25ºC时的推荐用量。为达到与25ºC时相近的凝固时间,当室温低于25ºC时,可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20ºC时建议使用正常推荐用量的1.5倍,15ºC时建议使用正常推荐用量的2倍。
注意事项
Ver.CN20241012