12204ES gDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min，依然片段偏大是什么原因?
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2026-08-24
若使用本公司gDNA片段化产品按说明书酶切条件（20 min）酶切后仍未达到预期效果，建议优先排查以下问题：（1）DNA质量问题：Input DNA中若引入高浓度金属离子、螯合剂或其他盐离子，可能抑制酶活性。建议将 DNA稀释至ddH₂O或不含 EDTA 的10 mM Tris Buffer (（pH 7.5-8.0）中，去除干扰离子后重新酶切。（2）样本类型问题：若样本为反转录得到的全长cDNA，其纯度可能影响酶切效率，需确保cDNA无基因组DNA污染。（3）特殊样本处理：对于环状DNA，酶切时间可能需延长，建议根据实际样本类型摸索酶切条件。（4）样本预处理：特殊样本（如FFPE、高GC含量DNA等）可考虑先通过磁珠纯化去除杂质，再进行酶切；或适当延长酶切时间（如30-60 min），以确保酶切充分。
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