文库产量低可能由以下原因导致：（1） DNA 质量低，样本中含抑制物（抑制酶活性等）：Input DNA制备过程中带入的高浓度金属离子、螯合剂或其他盐，可能影响末端修复及A 尾添加等步骤的反应效率，。建议DNA 在TE 溶液中进行片段化，避免在无菌超纯水中操作。（2）RNA 污染：样本中存在RNA 污染会导致DNA 定量不准确，使文库构建时DNA 上样量不足。（3）PCR-free文库上样量不足：当使用完整接头且Input DNA 大于 200 ng时，无需进行PCR 扩增；若文库拷贝数过低无法直接测序，可在接头连接完成后对DNA 文库进行PCR 扩增。（4）接头降解：接头存储不当会出现降解，影响连接效率。一般稀释过的接头可在室温放置48小时。判断接头是否降解的方法：①用安捷伦 2100毛细管电泳检测，通过电泳条带大小判断；若未降解，条带大小约为62 bp（complete adapter），若降解则无条带或条带很小。②用Qubit 酶标仪等检测仪器进行浓度测量，粗略判断接头是否降解。检测方法：取1 μL 15 μM的complete 接头（货号：12615ES-12618ES），若Qubit检测浓度约为600 ng/μL，则接头正常；若小于600 ng/μL，则接头可能降解成单链或小片段。