40301ES流式分析细胞周期，收集了10的6次方细胞，但细胞在乙醇固定之后，还可以看到细胞沉淀的，但PBS洗涤两次之后，就基本没什么细胞沉淀了，上机发现看不到细胞了。怎么解决这个问题？
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2026-08-24
1. 先用冷PBS悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入预冷的无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是：直接加入乙醇会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。乙醇固定之后没有细胞沉淀。
2.很可能是洗细胞的过程中丢失了，解决办法有：采用尖底的离心管和水平离心机。离心后尽量用吸管吸取上清，不要倾倒；吸上清时残留1mm左右的水膜，不要吸完。离心的转速或时间可稍微增加一点儿。每次加溶液时，吸头最好不要接触液面；混匀时最好不要用吸头吹打，以免吸头挂壁带走部分细胞。3.固定后首次加入PBS洗涤细胞时降低加入的PBS体积为200μl而非1mL，可有效改善细胞损失。
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