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40310ES Annexin V-PE 染色失败或者阳性率偏低。
40310ES Annexin V-PE 染色失败或者阳性率偏低。
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2026-08-24
首先要确定实验中使用的诱导剂是否能产生凋亡。可通过设设置凋亡诱导的阳性药物对照来排除这一情况。Annexin V-PE 染色失败，最常见的实验操作原因是贴壁细胞消化不当。Annexin V 跟 PS 的结合需要 Ca2+，Binding Buffer 中含有 2.5 mM 的 Ca2+，含 EDTA 的胰酶消化会影响染色，建议使用无EDTA 的胰酶。若使用含EDTA 的胰酶，必须通过洗涤步骤彻底去除EDTA。用 PBS 洗涤细胞沉淀后，应尽量去除残余液体。残留PBS 中的磷酸根，会形成磷酸钙沉淀。Binding Buffer 的瓶盖要紧闭，防止空气中的 CO2 进入后形成碳酸钙沉淀，减少游离Ca2+，导致实验失败。接触其他缓冲液如吸取PBS 后不更换枪头也会导致游离的 Ca2+减少。一些细胞其细胞膜上 PS 的密度较低，染色效果很差，此时建议更换细胞株或者采用 TUNEL 试剂盒检测凋亡。如果是贴壁细胞，药物诱导后漂浮的细胞也要收集，这部分细胞往往是凋亡阳性的细胞，丢弃会造成阳性结果偏低。
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