40276ES为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？
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2026-08-24
请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
为确保 Click 反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；
由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化 Click 反应的有效浓度降低。所以在 Click 反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如 EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click 反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；
当铜离子在合适的化合价时，Click 反应才有效。Click 反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
延长Click 反应的时间至超过 30 分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click 反应试剂再次进行 30 分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。
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