固定剂、破膜剂用于细胞内细胞因子染色前对细胞膜的处理。固定剂起稳定细胞膜、保持细胞膜表面抗体与抗原结合的作用；破膜剂使流动的、完整的细胞膜产生小孔以利于抗体进入细胞。用流式细胞仪检测细胞内抗原及DNA时，对待测细胞进行固定、破膜处理后，加入相应抗体或检测试剂，孵育一定时间即可上机分析。

应用实例（仅供参考）

1. 收获待测细胞，1000 rpm离心10分钟，弃上清。

2. 加入500 uL预冷(4℃)固定剂。

3. 室温孵育10分钟。

4. 1000 rpm离心10分钟。

5. 弃上清，加入PBS洗一次，1000 rpm离心10分钟。

6. 弃上清，加入1.5 mL破膜剂。

7. 室温孵育10-15分钟。

8. 1000 rpm离心5分钟。

9. 弃上清，加入适量破膜剂或流式染色缓冲液重悬细胞。

10. 加入检测抗体进行染色15分钟。

11. 加入PBS洗一次，1000 rpm离心5分钟。

12. 弃上清，加入200 uL PBS重悬，用流式细胞仪进行分析。

2~8℃保存，避免强光直射，勿冰冻，有效期一年。

Q:做核内因子的流式分析，这个破膜剂能破核膜吗？

A:不能，皂素是相对理想的细胞破膜剂，但无法破核膜，若需破核膜还是要用 Triton-X 和Tween-20。

Q:破膜剂能不能先染膜抗体，然后破膜后再染细胞里面的，还是说需要破膜之后一起染？

A:先固定，再破膜，再染色，需要破膜之后一起染。

Q: 这个破膜剂破膜是可逆的吗？用于免疫荧光中，使用该破膜剂后封闭液、抗体稀释液及洗涤液是否都可以使用这款破膜剂？

A: 是可逆的，该破膜剂为皂素。封闭液推荐使用该破膜剂配置1%的BSA，同样可以使用该破膜剂用于抗体稀释以及洗涤液。