弗氏不完全佐剂(IFA) Incomplete Freund's Adjuvant（60719ES）

弗氏佐剂(Freunds Adjuvant)由Jules Freund在20世纪40年代发明，它是将抗原水溶液与油剂等量混合，再加乳化剂制成油包水的抗原乳剂，是目前动物实验中最常用的佐剂。弗氏佐剂分为含结核杆菌的弗氏完全佐剂(Complete Freund's Adjuvant, CFA)和不含结核杆菌的弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund's Adjuvant, IFA)，主要用来诱导小鼠胶原诱导的关节炎CIA模型和佐剂诱导的关节炎AA模型。

60718ES Complete Freund's Adjuvant 弗氏完全佐剂(CFA) 包含热杀死的非活性化结核杆菌，由石蜡油包水乳剂组成，刺激强烈且可引起持久的免疫反应，可用于诱导小鼠的持续性炎症疼痛模型等，主要引起Th1细胞免疫应答。

60719ES Incomplete Freund's Adjuvant 弗氏不完全佐剂(IFA) 刺激的免疫反应较弱，与弗氏完全佐剂(CFA) 相比，缺少结核杆菌这一成分，主要诱导Th2细胞免疫应答。

在大多数实验中，弗氏完全佐剂(CFA)一般用于初次免疫，弗氏不完全佐剂(IFA) 用于初次免疫后的加强免疫，俩者皆广泛用于胶原诱导性关节炎（CIA）和佐剂诱导的关节炎（AA）模型。

本产品是一种用于增强免疫反应的佐剂，但不含灭活的分枝杆菌，常用于制备免疫动物模型，如疫苗研究和抗体生产。

研究应用：

1. 疫苗研究：用于制备实验性疫苗，增强疫苗的免疫效果。
2. 抗体生产：用于免疫动物，提高抗体滴度和特异性。
3. 免疫学研究：用于研究免疫反应机制和免疫细胞功能。

使用说明

【具体使用浓度请参考相关文献，并根据自身实验条件等进行摸索和优化，以下浓度及步骤仅供参考】

1. 胶原诱导性关节炎 (collagen-induced arthritis,CIA)建模的使用步骤（仅供参考）

1）小鼠模型

造模方法：将牛二型胶原（CⅡ）溶液与完全弗氏佐剂（CFA）在4℃（冰浴）无菌的条件下等体积混合乳化，配制成Ⅱ型胶原乳剂。将该乳剂注射于小鼠尾根部皮内0.1-0.2 mL，使小鼠引发炎症，在注射后的第21日再于小鼠的腹腔中注射0.1-0.2 mL的Ⅱ型胶原乳剂作为激发注射。首次免疫注射后，小鼠会出现局部的炎症刺激反应，1周左右就会愈合；而致炎后的24天小鼠会出现关节肿胀，从后足发展到前足再到尾部。

2）大鼠模型

造模方法：将牛二型胶原（CⅡ）溶液与不完全弗氏佐剂（IFA）混匀乳化，第1天于大鼠多部位皮内免疫注射，1周后腹腔注射加强免疫，二次免疫3-7天内即可得到模型。在致敏7天后，踝关节会轻度肿胀和皮肤发红，3周后症状加重，甚至皮肤发生溃疡；5- 6周后病理改变进一步加重，关节软骨及软骨下骨质均受血管翳的侵蚀和破坏。

1. 佐剂诱导的关节炎(adjuvant Arthritis,AA)建模的使用步骤（仅供参考）

造模方法：用于大鼠皮内注射致炎，一般于致炎后10-20天出现续发炎性症状，约在20天达到高峰。炎症表现以踝关节为重，可侵及足垫和全足。

1. 卵蛋白诱导性关节炎建模的使用步骤（仅供参考）

造模方法：多数采用大鼠，将卵蛋白溶解于生理盐水配成20 g/L的溶液，与等量弗氏佐剂充分混合，于动物背部皮下注射，连续3周每周注射1次，第5周于关节内注入5 mg溶解的卵蛋白。该模型发病率高，卵蛋白诱发的关节炎模型病理改变明显，且炎症持续时间久。

1. 制备抗体的使用步骤（仅供参考）

1）用生理盐水或者缓冲液把抗原稀释至适当浓度，具体抗原用量及注射量需根据免疫要求确定。

2）根据所需注射量配制乳状液，实验表明较好的使用比例是30-50%，30%的抗原含量乳化后较粘稠，50%的抗原含量乳化后粘性有所降低。夏季建议使用低浓度乳化，冬季建议使用高浓度乳化。

3）充分混均佐剂与抗原，使抗原乳化，制备成“油包水”乳状液，给动物进行注射。

5. 制备抗体时的免疫方案（仅供参考）

1）多抗制备的免疫方案

制备多抗时，可采用同一种免疫部位注射，也可以多种部位注射，但初次免疫建议在皮下进行。免疫剂量根据被免疫的动物、免疫部位以及抗原本身确定。以皮下注射为例，兔子首次免疫的抗原一般在200-1000 μg之间，大鼠首次免疫的抗原一般在100-500 μg之间，小鼠首次免疫的抗原一般在10-100 μg之间。

首次免疫后，一般抗体亲和力不够，需要在首次免疫后的3-4周进行加强免疫，加强免疫的剂量一般为首次免疫剂量的20%-50%。尾静脉或脾内方式的加强免疫可减少至1-10 μg之间。第二次、第三次的加强免疫间隔可以缩短至2-3周，间隔太短起不到加强的效果，还易引起免疫耐受；相隔太久，前面的免疫会失去初步刺激的效果。如果采用脾内免疫，则可以缩短免疫周期，加强免疫的次数一般为3次。

2）单抗制备的免疫方案

单抗制备时，免疫动物一般第一针采用皮下免疫，后面的加强免疫采用腹腔免疫或皮下免疫，免疫周期和多抗相似。以小鼠为例，一般皮下注射每个注射点注射30-50 μL左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点。

2~8℃保存，有效期2年。