Avi标签蛋白生物素标记试剂盒(BirA法)是一种通过生物素连接酶(BirA)对Avi标签融合蛋白快捷、高效地进行生物素标记的试剂盒，进而可以利用Streptavidin或Avidin进行目标蛋白的检测、纯化等实验步骤。

Avi标签是一个由15个氨基酸组成的短肽标签，BirA能够在ATP和生物素存在的条件下，将生物素连接到Avi标签的赖氨酸残基上，实现对目的蛋白的生物素标记。此方法具有多种优点，包括Avi标签小且对融合蛋白影响小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好。标记后蛋白与链霉亲和素（Streptavidin）的亲和力高等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和、更简单，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强。

Avi标签蛋白生物素标记后，可以应用于多种生物学检测方法。如免疫学检测：ELISA、免疫荧光、流式细胞术、生物膜干涉（BLI）、表面等离子体共振（SPR）分子互作检测等。生物素与链霉亲和素（Streptavidin）的结合系统，具有高度亲和力、高灵敏度、特异性强和稳定性好等优点，广泛应用于多种检测系统。

组分信息

实验步骤

1.体外生物素标记带有Avi标签的蛋白或多肽。

按照下表配制一个反应体系。轻轻吹打混匀后，30℃孵育30分钟，带有Avi标签的蛋白或多肽即可完成生物素标记。

注：
a. 本反应体系的体积可根据实际需要进行缩小或放大。很多情况下也可以设置为20 μL的反应体系。
b. 蛋白(多肽)底物的反应终浓度通常不宜超过40μM。
c. 如果蛋白(多肽)底物的反应终浓度低于40μM，为保证生物素标记效果，需要适当延长反应时间，或增加 BirA的用量，或对蛋白(多肽)底物进行浓缩以提高浓度。例如：蛋白(多肽)底物反应终浓度为20μM，可将反应时间延长至1小时；如果需要在30分钟使反应，终浓度为20μM蛋白(多肽)底物几乎完全被生物素标记，则需要加入约2倍用量的 BirA。

d. 如果蛋白(多肽)底物必须低温以维持活性，可将反应体系置于4℃，适当延长反应时间，并适当增加 BirA 的用量。

2.生物素标记效率检测

可以通过类似于Western blot的电泳和印迹检测实验进行检测，即在电泳、转膜后洗涤、封闭，随后与经过适当稀释的辣根过氧化物酶标记Streptavidin 孵育，洗涤3-5次后，使用ECL类试剂通过化学发光成像来检测生物素标记效率。

3.生物素标记的蛋白或多肽纯化

推荐使用Streptavidin agarose或磁珠分离纯化生物素标记的蛋白或多肽。

注意事项

1.使用时需要注意避免反复冻融Biotin Ligase Buffer B (10X)，以保持其活性，首次解冻后建议分装。
2. BirA的用量、反应温度和时间可以根据实验需要进行优化，例如BirA的浓度可在0.2X-2X之间调整。
3.本产品的蛋白(多肽)底物为带有Avi标签的融合蛋白或多肽。
4.反应溶液中的盐或试剂的终浓度有一定要求，如NaCl < 100 mM，Glycerol < 5%，(NH4)2SO4 < 50 mM，Tris <50 mM，否则会抑制生物素连接酶的活性。
5.本产品仅限科研用途使用。

1.Avi标签小且对融合蛋白影响小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记。

2.生物素标记效率高，可重复性好。

3.标记后蛋白与链霉亲和素（Streptavidin）的亲和力高等。

4.相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和、更简单，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强。

-25 ~ -15℃保存，有效期1年。