钙(Ca²⁺)是构成骨骼牙齿并作为细胞内关键信号分子的重要元素。为监测其动态，Mag-Fluo-4 AM等探针利用AM酯修饰实现细胞穿透与胞内滞留，通过与Ca²⁺结合产生高灵敏度、低毒性的荧光信号。该探针家族的Mag-Indo-1/AM在5 mM浓度下还可用于检测细胞内镁离子(Mg²⁺)。

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1. Mag-Fura-2 AM储存液制备：

使用优质无水DMSO配制Mag-Fura-2 AM储存液（2~5 mM或10 mM）。

【注】Mag-Fura-2 AM 储存液配置后，建议分装成单次使用量，并于-20℃或-80℃避光保存，避免反复冻融。

2. Mag-Fura-2 AM工作液制备：

使用Hanks缓冲液或Hepes缓冲液稀释储存液，配置成2~20 µM（或1~10 µM）Mag-Fura-2 AM工作液。一般大多数细胞作用终浓度为4~5 µM。

【注】在缓冲液配置工作液时，可适当添加0.04% Pluronic F-127，能增加Mag-Fura-2 AM水里面溶解性。

【注】工作液现用现配，切不可久置。

【注】具体工作液浓度可参考相关文献进行，并根据实验实际情况进行适当优化和调整。

【注】若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1~2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5~1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。

3. 可参考使用方案：

3.1 向培养过夜的细胞的细胞板里加入1X Mag-Fura-2 AM工作液。若待测化合物与血清存在干扰，加入染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.2 37°C细胞培养箱中孵育30~60 min。部分细胞，延长孵育时间（>1 h）可增强信号强度。

3.3 移除工作液，更换为HHBS缓冲液或其他合适的缓冲液（如条件允许，可加入1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。

3.4 加入刺激物后，立即使用配备Fura 2滤光片组的荧光显微镜或者集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在Ex/Em1：340 nm/510 nm到475 nm和Ex/Em2 = 380 nm/510 nm到475 nm进行荧光强度检测。

粉末-25~-15℃保存，有效期1年。