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Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) MaxUp核糖体RNA去除试剂盒(人/小鼠/大鼠)
产品货号:12253ES24
产品规格:24 T
产品价格:¥11363.00
类别:核糖体去除

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格/

    Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)

    MaxUp 核糖体RNA去除试剂盒(人/小鼠/大鼠)

    12253ES24

    24 T

    11363.00

    12253ES96

    96 T

    37363.00

     

    产品描述

     

    Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)利用RNase H消化法去除人、小鼠、大鼠总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNAmRNA)和其它非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA(如FFPE RNA)均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成或其它下游应用。

     

    适用范围

     

    适用于人、小鼠、大鼠来源的100 ng~1 μg RNA样品;适用于完整或部分降解RNA(如FFPE RNA)样品。

     

    产品组分

     

    1611903430234461.png

     

    运输与保存方法

     

    干冰运输,-20°C存放。

    有效期一年。

     

    注意事项

     

    1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

    2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

    3. RNA样品最大投入体积为11 μL,若样品体积较大,可先进行浓缩。

     

    自备材料

     

    1. RNA纯化磁珠:Hieff NGS® CleanerCat#12602)或其他等效产品。

    2. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) Cat#11201)或其他等效产品;

    3. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

     

    操作步骤

     

    1. 探针杂交

    1.1 将探针和杂交Buffer-20 °C 取出,解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。

    1.2 准备RNA样品根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至11 μL

    1.3 按照表1200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

    1 探针杂交反应体系

    名称

    体积(μL

    Hybridization Buffer

    3

    Probe Mix(H/M/R)

    1

    Total RNA

    11100 ng~1 μg

    Total

    15

    1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

    1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

    2 探针杂交反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    On

    95℃

    2 min

    95℃-22℃

    0.1℃/s

    22℃

    5 min

    4℃

    hold


    2. RNase H消化

    2.1RNase H消化试剂从-20 °C取出,解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。按照表 3 所示,配制RNase H消化反应体系。

    3 RNase H消化反应体系

    名称

    体积(μL

    RNase H Buffer

    3

    RNase H

    2

    上步产物

    15

    Total

    20

    2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

    2.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中,设置反应程序:热盖50℃;37℃30 min 4℃hold,进行RNase H消化反应。

    3. DNase I 消化

    3.1DNase I消化试剂从-20 °C 取出,解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。按照表4所示,配制DNase I消化反应体系。

    4 DNase I消化反应体系

    名称

    体积(μL

    DNase I Buffer

    27.5

    DNase I

    2.5

    上步产物

    20

    Total

    50

    3.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

    3.3 将上述 PCR 管置于PCR仪中,设置反应程序:热盖50℃;37℃30min 4℃hold,进行DNase I化反应。

    4. RNA纯化

    4.1 准备工作:将 Hieff NGS® RNA Cleaner Cat#12602磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

    4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

    4.3 吸取 110 μL Hieff NGS® RNA Cleaner2.2×Beads:DNA=2.2:1)至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min

    4.4 PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

    4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

    4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。 10 μL移液器吸干净残留液体。

    4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

    4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min

    4.9 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL 上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

    【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

     

    案例展示

     

    qPCR验证: 1μg 293T RNA进行rRNA去除,利用qPCR对比去除前后rRNA基因和mRNA基因的表达量变化。

    图片.png



    HB210128