您好,欢迎来到上海翊圣生物科技有限公司官方网站!
400-6111-883
| EN
400-6111-883
Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module 快速DNA连接模块
产品货号:12604ES24
产品规格:24 T
产品价格:¥3263.00
类别:建库模块与单酶原料

说明书下载

  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module

    快速DNA连接模块

    12604ES24

    24 T

    3263.00

    12604ES96

    96 T

    10863.00


    产品描述

    Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,其中最大的亮点为本产品采用一款我公司自主研发的高效连接酶Fast T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®测序平台适用的DNA接头,具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。本产品已与Hieff NGS® UltimaTM Endperp Mix(Cat#12605),2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。


    产品组分

    产品编号

    组分名称

    产品编号/规格

    12604ES24

    12604ES96

    12604-A

    Fast T4 DNA Ligase

    120 μL

    480 μL

    12604-B

    5×Fast Ligation Buffer

    480 μL

    960×2 μL


    质量控制

    Fast T4 DNA Ligase

    1. SDS-PAGE纯度:>95%。

    2. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含5μl本酶和1 μg HindIII-λDNA,37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含5μl本酶和1 μg T3 DNA,37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。

    3. RNase活性:5 μl本酶中加入40 ng FAM-RNA及,37°C下孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。

    4. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中加入5 μl本酶和1 μg φX174 RF I DNA,37°C下孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。

    5. 核酸外切酶活性:50 μL反应体系中加入至少5 μl本酶和1 μg声振的[3H]DNA(105 cpm/μg),37°C下孵育4小时,释放的放射性<0.1%。

    6. 功能活性(平末端连接):50 μL反应体系,在1×Fast Ligation Buffer中,加入0.5 µL Fast T4 DNA Ligase,18 μgHaeIII φX174,16°C孵育7.5分钟。经琼脂糖电泳检测,片段连接率>95%。

    7. 功能活性(接头连接):50 μL反应体系,在1×Fast Ligation Buffer中,加入0.125 µL Fast T4 DNA Ligase,8 nmol12 bp接头,16°C孵育过夜。经琼脂糖电泳检测,无明显未连接接头。

    Fast Ligation Buffer

    1. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg HindIII-λDNA,37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg T3 DNA,37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。

    2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg φX174 RF I DNA,37°C下孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。

    3. RNase活性:在1×Fast Ligation Buffer中加入40 ng FAM-RNA,37°C下孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。

    4. 磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast Ligation Buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    -20℃保存,效期一年。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法

    1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

    表1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

    Input DNA

    Adapter : Input DNA摩尔比

    Input DNA

    Adapter : Input DNA摩尔比

    1 μg

    10:1

    50 ng

    100:1

    500 ng

    20:1

    25 ng

    200:1

    250 ng

    40:1

    1 ng

    200:1

    100 ng

    100:1

    500 pg

    400:1

    【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。

    2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。

    表2  Adapter Ligation体系

    名称

    体积(μL)

    dA-tailed DNA

    60

    5×Fast Ligation Buffer

    20*

    Fast T4 DNA Ligase

    5

    DNA Adapter

    X**

    ddH2O

    To 100

    【注】:*对于5×Fast Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

    **根据自身需求加入适量的接头。

    【接头添加计算举例】:当Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?

    第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];

    Input DNA 摩尔数(pmol)=100÷(0.66×300)=0.5 pmol;

    第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例;

    根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;

    第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);

    接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)

    综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)

    相关产品

    建库试剂盒

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® MaxUpTMⅡDual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina®

    12300ES24/96

    24/96 T

    询价

    Hieff NGS® UltimaTM DNA Library Prep Kit for Illumina®

    12199ES24/96

    24/96 T

    6783/25563

    Hieff NGS® MaxUpTMⅡDNA Library Prep Kit for Illumina®

    12200ES24/96

    24/96T

    6486/23567

    Hieff NGS® OnePotTMⅡDNA Library Prep Kit for Illumina®

    12204ES24/96

    24/96 T

    7583/28663

    Hieff NGS® Fast TagmentTM DNA Library Prep Kit for Illumina®

    12206ES24/96

    24/96 T

    6155/23855

    文库构建磁珠

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® cfDNA Clean Beads(100~200 bp)

    12599ES08/56

    5/60 mL

    1666/9106

    Hieff NGS® SmarterTM DNA Clean beads (50 bp以上)

    12600ES08/56

    5/60 mL

    1386/7586

    Hieff NGS® DNA Selection Beads(Superior AMPure XP alternative)

    12601ES08/56

    5/60 mL

    986/6286

    Hieff NGS® RNA Cleaner

    12602ES08/56

    5/60 mL

    1066/4266

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit

    12603ES24/96

    24/96 T

    616/2266

    建库接头

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1/2

    12611/12ES02

    48×2 T

    1493

    Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 1/2

    12613/14ES02

    96×2 T

    2753

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3

    12615/16ES04/16

    12×4/12×16 T

    1256/4536

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4

    12617/88ES04/16

    12×4/12×16 T

    1256/4536

    Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®,(96 Index)

    12610ES96

    96 T

    1365

    建库模块

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module

    12607ES24/96

    24/96 T

    3263/10863

    Hieff NGS® Ultima Endprep Mix

    12608ES24/96

    24/96 T

    2066/6166

    Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent

    12609ES24/96

    24/96 T

    1462/5362

    2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification

    12621ES24/96

    24/96 T

    583/1783

    Hieff NGS® Dual-Mode cDNA Synthesis Kit

    12250ES24/96

    24/96 T

    4885/16485

    文库定量

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix

    12302ES05

    500 T

    1526

    Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6)

    12307ES09

    6×96 μL

    2126

    dsDNA HS Assay Kit for Qubit® 

    12640ES60/76

    100/500 T

    686/2696

    多重PCR定制咨询

     

     

    HB190403