10907ES从质粒上酶切的产物可直接连接 Topo 载体吗？为什么？
1
2026-08-24
Topo 载体进行连接反应的时候需要 5`羟基端和 Topo 酶发生反应。PCR 产物 5`羟基端没有磷酸化， 可以直接进行 TOPO 克隆。但是，酶切产物 5`端为磷酸化状态，可以直接进行 TA 克隆的，但是不能进行 Topo 克隆。如果需要，可以用牛小肠碱性磷酸酶（CIP）进行去磷酸化处理后连接 Topo 载体。
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10907ES从质粒上酶切的产物可直接连接 Topo 载体吗？为什么？
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2026-08-24
Topo 载体进行连接反应的时候需要 5`羟基端和 Topo 酶发生反应。PCR 产物 5`羟基端没有磷酸化， 可以直接进行 TOPO 克隆。但是，酶切产物 5`端为磷酸化状态，可以直接进行 TA 克隆的，但是不能进行 Topo 克隆。如果需要，可以用牛小肠碱性磷酸酶（CIP）进行去磷酸化处理后连接 Topo 载体。
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