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Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶
产品货号:10135ES10
产品规格:10 U
产品价格:¥96.00
类别:高保真PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase  高保真DNA聚合酶

    10135ES10

    10 U

    96.00

    10135ES60

    100 U

    626.00

    10135ES76

    500 U

    2356.00

    10135ES80

    1000 U

    4256.00


    产品描述

    Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子,扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性,非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。


    产品组分


    编号

    组分

    产品编码/规格

    10135ES10

    (10 U)

    10135ES60

    (100 U)

    10135ES76

    (500 U)

    10135ES80

    (1000 U)

    10135-A

    Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL)

    5 μL

    50 μL

    250 μL

    2×250 μL

    10135-B

    2×Canace® PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

    300 μL

    3×1 mL

    15×1 mL

    30×1 mL


    产品应用

    基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


    活性定义

    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA –Hind III,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    PCR反应体系(推荐冰上配制)

    组分

    体积

    终浓度

     ddH2O

    to 50 μL

    -

    Canace® PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

    25 μL

    DNA模板 

    适量

    -

    Primer正向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    Primer反向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)

    0.5 μL

    1 U/50 μL

    注:

    1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

    2)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。

    3)聚合酶添加:为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

    4)Mg2+终浓度:体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

    5)高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

    6不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)

    模板种类

    扩增片段1 kb-20 kb

    基因组DNA

    50 ng-200 ng

    质粒或病毒DNA

    10 pg-20 ng

    cDNA

    1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)


    PCR扩增程序

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98

    0.5-3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    30-35

    退火

    60℃

    20 sec

    延伸

    72

    15-30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    注:

    1)预变性温度和时间:荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。

    2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

    3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间推荐如下:质粒DNA等简单模板为15 sec/kb;cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb,根据实际情况可延长至40 sec/kb。

    4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端,产物直接用于克隆,请使用平末端连接载体。


    应用实例


    1.png 

    1: Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板:拟南芥基因组DNA,50 ng/50 μL;退火温度:60℃;延伸时间:30 sec/kb。M:1 kb ladder;1:2.1 kb;2:3.1 kb;3:4.2 kb;4:5 kb;5:6 kb。


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