_{Hieff NGS}^®  _{96 Single Index Primer Kit for Illumina}^® _{, Set 2（48种）是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含48种Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96种Index Primer，适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。}

_{冰袋运输。}

_{所有组分-20°C保存，有效期18个月。}

_{1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。}

_{2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。}

_{3. 本试剂盒每个Set包含48种Index Primer，每种Index Primer可以构建2个DNA文库，每个Set可以构建96个DNA文库。}

_{4. 切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。}

_{5. 使用Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下：}

产品描述
 

_{Hieff NGS}^®  _{96 Single Index Primer Kit for Illumina}^® _{, Set 2（48种）是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含48种Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96种Index Primer，适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。}

_{冰袋运输。}

_{所有组分-20°C保存，有效期18个月。}

_{1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。}

_{2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。}

_{3. 本试剂盒每个Set包含48种Index Primer，每种Index Primer可以构建2个DNA文库，每个Set可以构建96个DNA文库。}

_{4. 切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。}

_{5. 使用Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下：}

Q:建库接头添加量如何计算？

A: 公式：Input DNA 摩尔数（pmol）≈ Input DNA 质量(ng)/ [0.66 × Input DNA 平均长度（bp）]。

举例：Input DNA 100ng，长度 300bp，那么接头应该添加多少？

根据公式，计算 Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5pmol 根据接头添加比例 100:1，接头摩尔比=100×0.5=50pmol

接头添加量=接头摩尔比（50pmol）÷接头浓度（15μmol/L）=3.34μL 备注：15μmol/L=15pmol/μL

Q:试剂盒中是否包含短接头和 Index primer?

A：内含短接头、通用引物以及index primer，客户如果觉得Index 数目不能满足需求，需自行购买额外的短接头试剂盒。

Q:关于我们接头的交叉污染率以及操作过程中可能引入的污染的问题：

A:我们接头的一个交叉污染率，大概在 0.5%左右，仅供参考；进口接头产品，完整的污染率大概在 1%左右，这里面包含接头原本的污染率（占比更多一些）以及操作中引入的。如果使用 UDI 接头，这个污染率大概可以控制在 0.01%左右的；操作中引入的大概污染率，实验场地、操作人员、枪头、吸取和释放试剂时候导致的微小飞溅等等，所以到目前为止没有固定且有效的方法可以去检测操作引入交叉污染这样一个指标。

Q: 接头连接之后可以直接进行分选吗？

A：不可以，Ligation Enhancer 内含高浓度的 PEG，会对分选造成显著影响，所以接头连接后如果进行片段分选必须先纯化。