转染的类型

细胞转染试剂已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规试剂，转染试剂在基因功能研究、基因表达调控、突变分析，以及基因治疗、细胞治疗、蛋白生产、疫苗生产等方面应用广泛。

根据转染后核酸是否整合到宿主细胞染色体中分成“瞬转”（瞬时转染）和“稳转”（稳定转染）。不同转染方法的转染效率、细胞毒性、对正常生理学的影响和基因表达水平各不相同，其原理、应用与特点比较如下表所示：

表1 不同转染方法的比较

技术	原理	优点	缺点
化学转染方法
阳离子脂质体	带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。	操作快速简单结果可重复转染效率高可转染DNA，RNA和蛋白质适用于生产瞬时和稳定的蛋白质可用于体内转染	需进行条件优化(一些细胞系对阳离子脂质体较敏感) 有些细胞系不容易转染血清的存在干扰复合物的形成，导致低转染效率培养基中血清的缺失会增加细胞毒性
磷酸钙共沉淀	磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞	便宜且容易获得适用于生产瞬时和稳定的蛋白质转染效率高（不限制细胞系）	需要仔细制备试剂 – CaPO4溶液对pH，温度和缓冲盐浓度的变化敏感可重复性较差有细胞毒性，尤其对原代细胞不能采用RPMI培养基，由于其含高浓度的磷酸盐不适用于动物体内转染
葡聚糖	带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞。	操作简单结果可重复便宜	对某些细胞有化学毒性只限于瞬时转染转染效率低，尤其在原代细胞中
其他阳离子聚合物	带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。	在血清中稳定，对温度不敏感高转染效率（限制细胞系）结果可重复	对某些细胞有毒性不能生物降解（树枝状大分子）多用于瞬时转染，较少用于稳定转染
生物转染方法
病毒转染	本能感染细胞，传递遗传物质	高转染效率适用于较难转染的细胞系可用于体内转染可用于构建稳定表达或瞬时表达的细胞系	被转染的细胞系必须含有病毒受体基因插入大小受限（病毒载体~10 kb，非病毒载体~100 kb）技术难度高，且构建重组蛋白很费时存在生物安全问题（激活潜在疾病，免疫原性反应，细胞毒性，插入突变，使细胞恶性转化）
物理转染方法
电转	高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入。	原理简单条件优化后可产生重复性的结果不需要载体不限制细胞类型和条件条件优化后可以快速转染大量细胞	需要特殊的设备需要优化电转脉冲和电压参数对细胞伤害很大细胞死亡率很高因此需要大量细胞会不可逆转地损坏细胞膜，溶解细胞
生物传递粒子传递（粒子轰击）	将DNA用显微重金属颗粒沉淀，再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞，DNA在胞内逐步释放表达。	不限制细胞类型和条件可用于动物体内转染方法直接，结果可靠不限制导入基因的大小和数量	需要昂贵的设备会对样品产生物理损伤细胞死亡率很高因此需要大量细胞需要准备微粒转染效率相对较低对于研究应用成本较昂贵
显微注射	用显微操作将DNA直接注入靶细胞核。	不限制细胞类型和条件可以单细胞转染方法直接，结果可靠不限制导入基因的大小和数量不需要载体	需要昂贵的设备有技术要求，且是劳动密集型（一次只能转染一个细胞）转染细胞数有限常引起细胞死亡

翌圣生物凭借其强大的研发实力和生产技术团队，持续对DNA和RNA转染试剂的配方进行优化，并改进生产工艺。公司推出了基于阳离子脂质体和阳离子聚合物的多样化产品线，以满足科研院校和企业在转染试剂领域的广泛需求。这些产品覆盖了转染试剂应用的各个领域，具有以下优势：

适用范围广：可用于质粒DNA、siRNA、miRNA、mRNA高效转染。
转染效率高：细胞转染效率高达90%以上，满足多质粒共转染。
多细胞系验证：经40+不同细胞验证均有较好转染效率。
应用场景广泛：稳转细胞株构建、瞬时蛋白表达、AAV及LV病毒包装。
文献引用频率高：400+高分文献引用，总影响因子高达3000+。
GMP产品支持商业化生产：拥有GMP级别转染试剂，已支持多家企业完成项目申报。

选择一款适合自己的转染试剂？

鉴于不同细胞类型和核酸（例如DNA、mRNA、siRNA等）在转染效率和条件上的特殊要求，选择一款合适的转染试剂对于实验的成功至关重要。根据实验的具体需求，选择一款能够优化转染效率并最小化细胞毒性的转染试剂，以保障实验数据的精确性和实验结果的稳健性。翌圣生物提供了一系列针对不同应用场景优化的产品，确保您能够找到最适合您研究目的的转染试剂，满足您的特定实验需求。

货号

40801ES

40802ES

40804ES

40806ES

40808ES

40809ES

40810ES

40815ES

40816ES

40818ES

40820ES

40821ES

40823ES

40824ES

产品名称

LipoBooster

3000转染试剂

Liposomal 2000脂质体转染试剂

PEI- MW25000 转染试剂（粉末）

细胞类型

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

昆虫细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

难转染

难转染

难转染

难转染

难转染

原代

原代

原代

原代

干细胞

干细胞

干细胞

干细胞

核酸类型

DNA

DNA

慢病毒

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

siRNA

siRNA

siRNA

miRNA

miRNA

miRNA

ASO

ASO

mRNA

mRNA

应用场景

用于各种核酸及原代等难转染细胞系

普遍用于多种细胞DNA转染

主要用于慢病毒感染增强

用于siRNA和miRNA转染，在多种难转染细胞上均能高表达

用于DNA及RNA转染，难转染细胞推荐

mRNA转染专用，在多种难转染细胞上均能高表达

针对sf9和High Five等昆虫细胞进行杆状病毒及质粒DNA转染

粉末PEI转染试剂，

用于大规模

细胞转染实验

基于293细胞进行慢病毒病毒、AAV病毒包装及蛋白表达

通用型病毒包装

转染试剂

（适用于LV及AAV）

AAV病毒包装

专用转染试剂

对标竞品

thermo-lipo3000

thermo-lipo2000

sigma

thermo-RNAiMAX

thermo-lip3000

thermo-MessengerMAX

thermo-Cellfectin

polyscience-PEI25000

polyscience-PEI MAX

thermo-293fectin

polyplus-PEIpro

polyplus-PEIpro GMP

polyplus-FectorVIR-AAV

polyplus-FectorVIR-AAV GMP

产品性能展示

DNA单质粒转染

6孔板体系中，使用翌圣40802ES转染试剂和竞品转染试剂在HEK293细胞上转染GFP表达质粒，转染后48h显微镜下观察各产品转染细胞后GFP表达情况。

DNA双质粒转染

细胞类型：HEK293；转染方式：12孔板瞬时转染；质粒总量1 μg；转染试剂用量3 μL

mRNA转染

在常用的易转染和难转染细胞系中，YEASEN产品的转染效率均优于竞品T的转染效率

客户案例

转染条件参考

除各产品的说明书外，客户根据各自具体的实验内容进行操作，在使用量上会有不同的差异，根据客户使用产品后反馈的体外细胞转染条件，进行了整理，供大家参考。

产品名称/货号	Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂/40802ES
细胞	培养容器	铺板密度	DNA量	Hieff trans量	转染效率
A549	6 well	90%	0.7 μg	1.15 μL	+++
BV 2	24 well	95%	0.2 μg	0.2 μL	++
C2C12	24 well	80% - 90%	1 μg	5 μL	++
DF 1	24 well	80% - 90%	0.5 μg	0.5 μL	+++
H520	6 well	80%	1.2μg	6 μL	++
HaCaT	96 well	70%	100 ng	1 μL	++
HCT116	6 well	90%	4 μg	10 μL	++
HEK 293	6 well	95%	2 μg	10 μL	80 - 90%
HEK 293FT	24 well	85%	1 μg	4 μL	90%
HEK 293T	12 well	1×105	1 μg	2 μL	+++
HEK 293T（悬浮）	30 ml	80%	30 μg	60 μL	++
Hela	12 well	90%	0.2μg	0.6 μL	90%
Hela	12 well	80%	1 μg	3 μL	+++
HepG2	12 well	80%	1 μg	3 μL	++
HUVEC	24 well	80%	1 μg	2 μL	++
MCF10A	10 cm dish	60%	5 μg	15 μL	++
N2A	24 well	70% - 80%	300 ng	900 μL	+
NCI H1975	6 well	80%	4 μg	10 μL	+++
NIH 3T3	6 well	90%	4 μg	10 μL	+++
Raw 264.7	35 mm dish	80%	1 μg	2 μL	90%
Vero	6 well	80%	3 μg	9 μL	+++
细胞	培养容器	铺板密度	siRNA量	Hieff trans量	转染效率
HK2	6 well	65%	100 pmol	6 μL	+++

常见问题

一 Hieff Trans™ Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂

Q: 配制核酸转染试剂复合物时能否有血清的存在？

A: 血清的存在会影响脂质体的形成，建议配制核酸转染试剂复合物时采用无血清培养基（一般推荐MEM 培养基）。

Q: 使用Hieff Trans™脂质体核酸转染试剂需要注意什么？

A:

1）细胞转染时，细胞密度以80%-95%为佳，具体铺板密度根据细胞情况酌情而定；

2）使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率；

3）制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂；

4）转染的时候培养基中不能添加抗生素；

5）试剂应该在2-8℃度保存，要注意避免多次反复长时间开盖；

6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3。

Q：转染后需要进行终止吗？

A：不需要。脂质体复合物可以稳定存在6个小时。如果在进行转染前没有进行细胞换液，为了保证细胞正常生长所需的营养，需要在4～6小时后换用新的培养基。但如果转染之前已进行过换液，则在脂质体转染后不需要进行再次换液。

Q：可否进行DNA和siRNA的共转染？效果如何？

A：可以，DNA和siRNA的共转染时候，siRNA转染效率会略微差点。

Q：转染试剂可否进行慢病毒包装的转染呢？

A：慢病毒包装是可以的。

Q：悬浮细胞转染是否可以用Hieff Trans™脂质体核酸转染试剂？

A：Hieff Trans™脂质体核酸转染试剂可以用于悬浮细胞转染，具体操作可见Protocol。另外，我们还推出了专门用于悬浮细胞的转染试剂（Cat No. 40805, 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂）。

二 Hieff Trans™ siRNA/miRNA体外转染试剂

Q: 转染试剂转染后需要换液吗？

A: 对于换液，可以区分两种情况；1、转染之前如果没有换液，应在转染6 小时左右后换液，以保证细胞生长所需营养，2、如果转染之前有换液，可以按照平时等到培养基出现营养不足时换液。

Q：转染试剂可以冻存吗？

A：不可冻存，因为转染试剂是一种PEI阳离子转染试剂，低温下冻存，会破坏PEI转染试剂的活性，因此最好是2-8℃度储存，保持最好的转染效能。

产品订购

产品名称	产品规格	产品货号
Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂	100 μL/1.5 mL	40801ES01/40801ES04
Hieff Trans® Liposomal 2000 Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂	100 μL/1 mL	40802ES01/40802ES03
Hieff Trans® Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂	200T	40803ES70
Hieff Trans®Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL)	500 μL/5×500 μL	40804ES76/40804ES86
Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA转染试剂	100 μL/1mL	40806ES01/40806ES03
Hieff Trans® Universal Transfection Reagent通用型转染试剂	0.5 mL /1 mL	40808ES02/40808ES03
Hieff Trans® mRNA Transfection Reagent mRNA转染试剂	0.1 mL /1 mL	40809ES01/40809ES03
Hieff Trans® Cell Insect Transfection Reagent 昆虫细胞转染试剂	100 μL/1mL	40810ES01/40810ES03
Hieff Trans®Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂	1g/5×1g	40815ES03/40815ES08
Hieff Trans®Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000（rapid lysis）线性PEI转染试剂（速溶型）MW40000	100mg/1g	40816ES02/40816ES03
Hieff Trans®293 Transfection Reagent 293细胞专用转染试剂	1 mL /10 mL /100 mL	40818ES03/40818ES10 /40818ES60
Hieff Trans® PEI Transfection Reagent转染试剂	1.5 mL /10 mL /100 mL	40820ES04/40820ES10 /40820ES60
Hieff Trans® PEI Transfection Reagent-GMP转染试剂	10 mL /100 mL/1L	40821ES10/40821ES60 /40821ES80
Hieff Trans® UltraAAV Transfection Reagent转染试剂	1 mL /10 mL /100mL	40823ES03/40823ES10 /40823ES60
Hieff Trans® UltraAAV Transfection Reagent-GMP转染试剂	10 mL /100 mL /1 L	40824ES10/40824ES60 /40824ES80

使用产品已发表的部分文献

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