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400-6111-883
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400-6111-883
Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit
产品货号:11147ES50
产品规格:50T
产品价格:¥1453.00
类别:一步法反转定量

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

    11147ES50

    50 T

    1453.00

    Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

    11147ES70

    200 T

    5493.00

    Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

    11147ES80

    1000 T

    21282.00

    Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

    11147ES92

    10000 T

    168882.00


    产品描述

    Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。

    本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer,Enzymes Mix等,缓冲液中已含有Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多达四重的反应。


    产品组分

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    11147ES50 (50 T)

    11147ES70 (200 T)

    11147ES80 (1000 T)

    11147ES92 (10000 T)

    11147-A

    2×Hifair® V MP Buffer

    500 μL

    1 mL×2

    10 mL

    100 mL

    11147-B

    Hifair® V Enzyme Mix

    50 μL

    200 μL

    1 mL

    10 mL

    11147-C

    RNase Free H2O

    500 μL

    1 mL×2

    10 mL

    100 mL

    【注】1) 2×Hifair® V MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

    2) Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。


    适用机型

    需添加High Rox适用机型 ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus

    需添加Low Rox 适用机型 ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

    Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

    不需要Rox校正的仪器型号

    Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

    Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

    Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

    Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR


    运输与保存方式

    冰袋运输。-20保存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。


    注意事项

    1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    反应体系(以20 μL为例)

    组分

    体积(μL)

    终浓度

    2×Hifair® V MP Buffer

    10

    Hifair® V Enzyme Mix

    1

    -

    Primer Mix (10 μM)

    各0.4

    0.2 μM

    Probe Mix (10 μM)

    各0.2

    0.1 μM

    模板 RNA

    Total RNA 1 pg-1 μg

    -

    RNase Free H2O

    to 20 μL

    -

    】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

    a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

    b) 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

    c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

    d) 反应体系:推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

    e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。


    标准扩增程序


    反应阶段

    温度

    时间

    循环数

    1

    逆转录

    50℃a

    15 min

    1

    2

    预变性

    95℃

    30 sec

    1

    3

    扩增反应

    95℃

    10 sec

    45

    60℃b

    30 secc

    【注】                                                                                             

    a) 逆转录:对于一些复杂模板或者高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度调整至55℃,有利于提高扩增效率

    b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

    c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。


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    3083

    dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

    10128ES72

    250μl

    253

    dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

    10128ES80

    1ml

    853

    HB200310