谷氨酰胺合成酶(GS)比色法测定试剂盒 Glutamine Synthetase Assay Kit(Colorimetric Method)（60437ES）

^{本试剂盒基于比色法原理，GS在ATP和Mg2+的存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下形成的络合物在540 nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定其吸光值来判定GS的活力。适用于动物血清/浆、组织等样本的检测。}

产品信息

组分信息

备注：

1）试剂一、试剂二使用时37℃预热20 min，充分混匀，如有沉淀，静置10 min，取上清待用。

2）试剂三使用时每瓶粉剂加入5 mL蒸馏水充分溶解待用。

使用说明

1.仪器试剂准备

含540 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿、37℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1）血清/浆

直接取样测定。

2）组织

按照组织重量(g)：提取液体积(mL)为1:10的比例混合后，冰水浴匀浆，4000转/分，离心10分钟，取上清置冰上待测。

3）细胞、细菌样本

^{收集细胞或细菌于离心管中，离心后弃上清，按照细胞或细菌数量(104个)：提取液体积(mL)为500:1的比例混合，超声波破碎细胞或细菌（条件：冰浴、功率20%或200W、超声3 s、间隔10 s、重复30次）后待测。}

3.操作表

备注：在进行正式实验前最好取1-2个样本上清进行预试，以便确定样本最佳取样浓度。

4.计算公式

标准曲线为：0.8348x+0.0008，R²=0.9999

1）血清/浆计算方法

单位定义：每mL血清/浆在每mL反应体系中每小时产生1 μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

计算公式：GS活力(μmol/h/mL) = (△A-0.0008)/0.8348 × V反总/V样

2）组织、细菌、细胞计算方法​      

①   按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时产生1 μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

计算公式：GS活力(μmol/h/mg prot) = (△A-0.0008)/0.8348 × V反总/(V样×Cpr)

②按样本鲜重计算

单位定义：每g组织在每mL反应体系中每小时产生1 μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

计算公式：GS活力(μmol/h/g) = (△A-0.0008)/0.8348 × V反总/(V样×W/V样总)

②   按细菌或细胞密度计算

单位定义：每1万个细胞或细菌在每mL反应体系中每小时产生1 μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

^{计算公式：GS活力(μmol/h/104cell) = (△A-0.0008)/0.8348 × V反总/(V样×500/V样总)}

其中，V反总：表示反应液总体积，0.75 mL；V样：表示取样量，0.175 mL；T：表示反应时间，0.5 h；Cpr：表示样本蛋白浓度，mgprot/mL(prot指蛋白)；W：表示样本质量，g；V样总：表示提取液总体积；500：表示细胞数，万个。

2～8℃保存，有效期6个月。