本试剂盒采用比色法测定维生素C（VC）的含量，测定原理如下：Fe3+与还原型抗坏血酸迅速作用生成Fe2+，后者与啡罗啉显色反应，可以测定血浆中维生素C的含量。
该方法的优点包括快速简便，重复性强，适用于适用于可测动物血清/浆、组织等的VC测定。
产品信息
| 货号 | 60433ES50 |
| 规格 | 50 T |
| 检测范围 | 0.2-89.3 μg/mL |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 装量 | 储存条件 |
| 60432ES-A | 试剂一 | 5 mL×1瓶 | 2℃～8℃ |
| 60432ES-B | 试剂二 | 1支 | 2℃～8℃ |
| 60432ES-C | 试剂三 | 1支 | 2℃～8℃ |
| 60432ES-D | 试剂四 | 0.2 mL×1瓶 | 2℃～8℃避光 |
| 60432ES-E | 试剂五 | 6 mL×1瓶 | 2℃～8℃ |
| 60432ES-F | 试剂六 | 粉剂6 mg×3支 | 2℃～8℃避光 |
备注：
1）试剂一应用液配制：用时按照试剂一贮备液：蒸馏水=1：14 稀释，混匀制备。
2）试剂二应用液配制：用时1支粉剂加0.36 mL的冰醋酸再加水至40 mL，溶解，2℃～8℃保存。
3）试剂三应用液配制：因较难溶解，用前2～4小时加95%酒精或无水乙醇60 mL充分溶解制备，2℃～8℃保存。
4）试剂四应用液配制：用时取0.15 mL 试剂四贮备液加水至25 mL 制备，现用现配。
5）试剂六：600 μg/mL Vc 标准品应用液配制：将 1 支标准品粉剂溶于10mL 试剂一应用液中制备；6 μg/mL VC标准品应用液配制：取600 g/mL VC标准品应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，10分钟内使用。
【注】：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10分钟内进行检测。
使用说明
1.仪器试剂准备
含536 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿（或酶标仪及96孔板）、37℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1M）、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。
2.样本前处理
1）血清/浆
直接使用。
2）组织
准确称取待测组织的重量，按重量（g）:体积(mL)= 1:9 的比例加入9倍体积的匀浆介质（推荐0.1 mol/L且pH值为7.0-7.4 的磷酸盐缓冲液或0.9%的生理盐水），冰水浴条件机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液（10%匀浆上清）待测，组织匀浆上清需测定其蛋白浓度。
3.上清液制备
取样本(或组织匀浆上清)0.15 mL 加试剂一应用液0.45 mL，旋涡混匀，放置15分钟后离心，3500～4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。组织样本也可以直接用试剂一应用液作匀浆介质匀浆制备上清液，计算时参考组织计算第二条公式。
4.操作表
| 试剂 | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 试剂一应用液(mL) | 0.4 | - | - |
| 6μg/mL Vc标准品应用液(mL) | - | 0.4 | - |
| 上清液(mL) | - | - | 0.4 |
| 试剂二应用液(mL) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 试剂三应用液(mL) | 1 | 1 | 1 |
| 试剂四应用液(mL) | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 充分混匀，37℃水浴30分钟。 | |||
| 试剂五(mL) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 充分混匀，静置10分钟，波长536 nm，光径1 cm，蒸馏水调零，测各管吸光度值。 | |||
5.计算公式
1）液体样本的计算：
VC含量(μg/mL) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × N
其中，C标准：表示标准品浓度，6 μg/mL；N：表示样本测试前稀释倍数(包括前处理稀释倍数4)
2）组织的计算：
VC含量(μg/mgprot) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × N/Cpr
VC含量(μg/g组织) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × N1 × V样总/W
其中，C标准：表示标准品浓度，6 μg/mL；N：表示样本测试前稀释倍数(包括前处理稀释倍数4)；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，mgprot/mL；N1：表示用试剂一应用液直接处理的样本在测试前的稀释倍数；W：表示样本质量，g；V样总：表示样本用试剂一应用液直接匀浆时加入的试剂一应用液的总体积，mL。
2～8℃保存，有效期6个月。
